【摘 要】
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第一部分HO-1-hPMSCs在PDC模型中的作用目的:利用绒毛-蜕膜共培养系统（Placenta-Decidua-Coculture model,PDC）模型验证hPMSCs和HO-1-hPMSCs对滋养细胞侵蚀和子宫螺旋动脉重铸的促进作用。方法:分离提取培养hPMSCs,并使用慢病毒转染hPMSCs使其过表达HO-1基因,收集hPMSCs和HO-1-hPMSCs条件培养基。实验分组为Contr
【基金项目】
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国家自然基金面上项目“HO-1基因修饰的胎盘间充质干细胞修复胎盘血管发育不良的机制研究”
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第一部分HO-1-hPMSCs在PDC模型中的作用目的:利用绒毛-蜕膜共培养系统（Placenta-Decidua-Coculture model,PDC）模型验证hPMSCs和HO-1-hPMSCs对滋养细胞侵蚀和子宫螺旋动脉重铸的促进作用。方法:分离提取培养hPMSCs,并使用慢病毒转染hPMSCs使其过表达HO-1基因,收集hPMSCs和HO-1-hPMSCs条件培养基。实验分组为Control组（DMEM/F12）,hPMSCs组（hPMSCs条件培养基）和HO-1-hPMSCs组（HO-1-hPMSCs条件培养基）。利用Transwell系统与蜕膜组织共培养,通过免疫荧光染色检测hPMSCs和HO-1-hPMSCs的条件培养基对蜕膜组织中,滋养细胞的侵蚀作用和子宫螺旋动脉的重塑作用的影响。结果:Control组观察到血管肌层轮廓清晰,可以见到完整血管,平滑肌层完整,CK7+滋养层浸润较少;hPMSCs组观察到血管轮廓不清晰,平滑肌层处于崩解过程,滋养细胞浸润较多;在HO-1-hPMSCs组中,观察到血管轮廓模糊,平滑肌细胞层崩解完全,更多的滋养细胞侵入蜕膜组织中。结论:HO-1-hPMSCs能够明显促进滋养细胞侵蚀功能和子宫螺旋动脉的重塑过程。第二部分HO-1-hPMSCs移植对L-NAME诱导的子痫前期大鼠模型的治疗效果探讨目的:探讨hPMSCs和HO-1-hPMSCs移植对子痫前期模型大鼠的治疗作用方法:首先分离提取hPMSCs,构建HO-1过表达的慢病毒,转染hPMSCs得到HO-1-hPMSCs。妊娠大鼠腹腔注射一氧化氮合酶抑制剂-亚硝基左旋精氨酸甲酯（N-NitroL-Arginine Methyl Ester,L-NAME）,建立子痫前期模型。分为4组（1）正常妊娠组:胎盘局部注射生理盐水;（2）子痫前期+vehicle组:造模后胎盘局部注射生理盐水;（3）子痫前期+hPMSCs组:造模后胎盘局部注射hPMSCs;（4）子痫前期+HO-1-hPMSCs组:造模后胎盘局部注射HO-1-hPMSCs。妊娠第19天,收集各组孕鼠尿液和测量各组孕鼠血压,检测是否改善子痫前期症状;并利用超声多普勒检测胎盘血液灌流（脐动脉和子宫动脉PI）和胎鼠情况（胎儿大脑中动脉RI）,于妊娠20天收集血清检测血管相关因子水平,然后收集胎盘胎鼠,称重验证妊娠结局改善情况,将肾脏组织行HE染色观察病理改变。胎盘组织冰冻切片,通过荧光显微镜观察GFP标记的hPMSCs在胎盘组织的存活及分布情况,并做免疫组化观察胎盘微血管密度的变化。结果:HO-1-hPMSCs局部治疗明显控制了子痫前期孕鼠的血压、蛋白尿和改善了肾脏损伤,增加了胎盘重量和胎鼠重量;超声多普勒结果显示HO-1-hPMSCs可以有效改善子痫前期孕鼠的胎儿和胎盘的血液灌流,说明HO-1-hPMSCs对孕鼠子痫前期有显著的治疗效果。绿色荧光示踪实验验证了细胞被成功移植入胎盘,分布于血管周围,说明细胞可能参与了成血管过程;经HO-1-hPMSCs治疗后的大鼠血清中促血管生成因子VEGF和Pl GF增多,抗血管生成因子sFlt-1和sENG分泌减少,说明HO-1-hPMSCs通过调控子痫前期大鼠的血管生成因子/抗血管生成因子平衡状态,改善胎盘血管发育异常,增加胎盘灌流,控制子痫前期症状,促进妊娠结局。结论:HO-1-hPMSCs通过调控促进血管生成因子/抗血管生成因子平衡状态或直接参与胎盘血管的修复,发挥治疗子痫前期的潜能。
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