【摘 要】
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目的:对乳制品行业和奶牛健康所面临的众多问题中,奶牛乳腺炎是最不可忽视的。目前,奶牛乳腺炎的防治仍以抗生素疗法作为主要手段不可避免的导致抗生素的不规范使用,多重耐药菌株不断出现,对临床实践中选择合适的治疗手段带来阻碍,由此噬菌体疗法作为治疗和预防奶牛乳腺炎的新型潜在抗菌制剂再次引起关注。但到目前为止,没有针对噬菌体鸡尾酒制剂安全性的系统评价。故此,本研究拟对噬菌体鸡尾酒制剂分别进行PCR筛查毒力基
【基金项目】
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八师石河子市促进科技成果转化引导计划（2019ZH05）； 石河子大学成果转化与技术推广计划（CGZH201908）；
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目的:对乳制品行业和奶牛健康所面临的众多问题中,奶牛乳腺炎是最不可忽视的。目前,奶牛乳腺炎的防治仍以抗生素疗法作为主要手段不可避免的导致抗生素的不规范使用,多重耐药菌株不断出现,对临床实践中选择合适的治疗手段带来阻碍,由此噬菌体疗法作为治疗和预防奶牛乳腺炎的新型潜在抗菌制剂再次引起关注。但到目前为止,没有针对噬菌体鸡尾酒制剂安全性的系统评价。故此,本研究拟对噬菌体鸡尾酒制剂分别进行PCR筛查毒力基因和抗生素抗性基因、全基因组测序、急性毒性试验、非特异性免疫毒性试验、特异性免疫毒性试验、乳腺毒性试验等对噬菌体鸡尾酒制剂进行系统的安全性评价,为其推广和应用奠定基础。方法:本研究对一株新的大肠杆菌噬菌体进行全基因组测序,使用PCR技术对毒力基因和抗生素抗性基因进行筛选;进行全基因组测序分析基因组信息确定毒力基因和耐药基因的存在情况,使用混合菌悬液构建小鼠乳腺炎模型,使用混合菌悬液（1.1×106CFU/m L、1.2×108CFU/m L、1.0×109CFU/m L）构建的小鼠乳腺炎模型。测定经过噬菌体鸡尾酒制剂处理后小鼠的急性毒性反应、Ig G和Ig M、相关炎症因子的含量。结果:（1）通过PCR技术未筛选到大肠杆菌噬菌体P10的抗生素抗性基因和毒力基因,全基因组测序技术结果与PCR结果一致,未发现编码耐药基因和毒力基因的相关基因。（2）噬菌体鸡尾酒制剂对小鼠进行接种后对其非特异性免疫中淋巴细胞百分数、中性粒细胞百分数与对照组相比较有显著差异的时间仅仅持续24 h之后数值与对照组无差异,该结果说明噬菌体鸡尾酒制剂接种后小鼠的白细胞吞噬的功能正常。（3）特异性免疫毒性试验中,接种噬菌体鸡尾酒制剂的试验组Ig G和Ig M与对照组相比较均出现显著性变化,Ig G在6周内表现上升趋势,与对照组差异极显著,Ig M在一周的时间达到浓度最高,之后开始下降,接种两周后与对照组相比无显著差异,该结果提示Ig G可以影响噬菌体鸡尾酒制剂在小鼠体内存在的时间。（3）对小鼠乳腺炎治疗结果显示使用噬菌体鸡尾酒制剂治疗效果与传统抗菌剂的治疗效果疗效相当。结论:（1）对大肠杆菌噬菌体P10全基因组测序结果分析,基因组中无编码毒力因子和耐药因子的相关基因,证实了临床应用的安全性,可考虑用作噬菌体鸡尾酒制剂用于奶牛乳腺炎的治疗。（2）噬菌体鸡尾酒制剂对小鼠无急性毒性,对小鼠体内的白细胞吞噬作为未产生影响,细胞因子分析结果表明未引起小鼠体内的细胞因子浓度异常。（3）噬菌体鸡尾酒制剂的治疗效果综合优于传统抗菌剂治疗方法。为噬菌体鸡尾酒制剂的安全性评价及推广与应用奠定基础。
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