目的:流感是一种严重的呼吸道感染疾病。在人类历史上曾今爆发过多次流感,其中包括1968年香港爆发的流感。但是流感病毒的致病机制现在尚不完全清楚。呼吸道是人体对外界环境中致病源的第一道防线,正常生理状态下富含粘蛋白的呼吸道表面液体可以黏附并通过纤毛摆动的方式清除外来致病源。位于极化气道上皮顶膜侧的上皮钠离子通道(epithelail sodium channels,ENaC)负责Na~+的跨膜转运,对于维持气道上皮的水盐转运平衡尤为重要。并且已有研究表明肺水肿是流感病毒造成急性肺损伤的特征之一。我们推测流感病毒可能通过改变ENaC功能破坏呼吸道上皮正常的水盐转运,从而破坏气道表面液体对外来致病源的清除作用。本课题旨在探讨流感病毒对ENaC的影响及作用机制。研究方法:1、用蛋白酶和脱氧核糖核酸酶消化小鼠气管组织来分离小鼠气管上皮细胞(mouse tracheal epithelial cells,MTECs),并将其种到Transwell小室中培养至形成完整的细胞单层。2、将流感病毒接种至10日龄的SPF级鸡胚尿囊腔中扩增病毒,用马丁-达比狗肾细胞测定病毒滴度。3、用透射电子显微镜观察MTECs的亚显微结构,并观察流感病毒是否破坏细胞间紧密连接。4、采用尤斯灌流技术分析流感病毒对MTECs短路电流的影响。5、用荧光定量聚合酶链式反应和蛋白免疫印迹法确定流感病毒对ENaC蛋白和mRNA的影响。6、应用激光共聚焦显微镜测定气道表面液体高度及黏性。7、使用酶联免疫吸附和蛋白免疫印迹法研究流感病毒对无赖氨酸激酶4(with-no-lysine-kinase-4,WNK4)的影响。8、应用小干扰RNA特异性敲减WNK4,验证流感病毒是否通过WNK4影响ENaC功能。结果:1、流感病毒能够明显降低阿米洛利敏感性短路电流。2、流感病毒能够抑制ENaC的蛋白和mRNA表达。3、流感病毒以时间依赖性方式提高WNK4在MTECs中的蛋白表达水平。4、敲减WNK4后,流感病毒不再降低ENaC蛋白表达水平以及阿米洛利敏感性电流。结论:流感病毒可能是通过WNK4调节ENaC功能,进而影响呼吸道液体转运。