转染Livin反义寡核苷酸对人胆管癌QBC939细胞增殖的抑制作用

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目的:转染Livin反义寡核苷酸(Antisense Oligodeoxynucleotide, ASODN)对人胆管癌细胞株QBC939细胞增殖、凋亡及对livin mRNA和Livin蛋白表达的影响。方法:应用脂质体(LipofectamineTM 2000)将5’端带FITC荧光标记的Livin ASODN瞬时转染入传代培养的人胆管癌QBC939细胞中,荧光显微镜观察转染24小时后不同浓度的Livin ASODN转染入细胞的情况,并计算转染率;实验分4组:ASODN组(反义组)、NSODN组(错义组)、Liposome组(脂质体组)、Control组(空白对照组)。MTT检测不同浓度不同时间的Livin ASODN对细胞生长增殖的抑制作用;选出最佳作用时间和浓度;采用RT-PCR检测转染后各组Livin mRNA表达的变化;细胞免疫荧光化学检测转染前后Livin蚩白的表达变化。流式细胞仪检测Livin ASODN转染前后对人胆管癌QBC939细胞凋亡的影响。结果:采用LipofectamineTM 2000介导下能成功将ASODN转染入胆管癌QBC939细胞中,并能获得较高的转染效率,在一定浓度范罔内呈现剂量依赖性,当ASODN浓度为500nmol/L,转染24h后可达最好的转染效率,为70.50±2.08;MTT检测结果表明5种浓度的反义寡核苷酸均可抑制QBC939细胞的增殖,在50-500nmol/L之间对细胞的抑制作用呈时间和剂量依赖性;ASODN组在不同浓度和时间对QBC939细胞的抑制率均明显高于NSODN组和脂质体组,在Livin ASODN 500nmol/L转染后60小时效果最好,抑制达46.41±1.13,差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR结果显示转染60小时后Livin ASODN组的Livin mRNA表达水平可明显降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);细胞免疫荧光化学结果显示转染后Livin ASODN组Livin蛋白的表达明显降低,达39.05±2.52,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测显示转染后60小时Livin ASODN组的细胞凋亡较对照组明显增多。结论:脂质体LipofectamineTM 2000能将ASODN有效转染入QBC939细胞中,转染后Livin ASODN能明显下调人胆管癌QBC939细胞Livin基因及蛋白的表达,有效抑制人胆管癌QBC939细胞的增殖,促进其凋亡。实验表明通过封闭Livin基因关键区域能有效抑制胆管癌细胞的增殖并诱导凋亡。
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