牙周组织和骨组织缺损是临床中常见的问题,引导组织再生术是治疗骨缺损最普遍的手段之一,提高引导组织再生膜的性能,制备新型的引导组织再生膜对牙周和骨的修复再生有重大意义。组织工程的应用为骨缺损的修复提供了新的方法和思路,但现有的组织工程方法仍存在很多问题,例如收获种子细胞时易破坏细胞的粘附分子,造成细胞-细胞间的信号连接丢失,种子细胞在移植时易流失等,对修复效果影响很大。细胞层技术是组织工程中收获种子细胞的一种新兴技术,目的是获得具有完整细胞外基质的片层状细胞,极大地减少了种子细胞的丢失和功能丧失。本文结合静电纺丝膜与细胞层技术,提出了一种制备细胞层的新方法,并将其作为新型的引导组织再生膜,对大鼠颅骨缺损模型进行了修复实验。利用静电纺丝技术制备了纤维呈网格和无纺排布两种形貌的聚乳酸／明胶纤维膜,研究了纤维形貌对骨髓间充质干细胞形态、增殖行为的影响,利用纤维膜制备细胞层得到细胞层／纤维膜复合膜片结构,通过组织学和免疫荧光染色证明了该膜片的形成,研究了该膜片的体外成骨分化性能。结果表明,纤维形貌对细胞粘附和铺展有明显的诱导效应,网格纤维比无纺纤维更能促进细胞的增殖,并提高了细胞层的成骨分化能力。将细胞层／纤维膜复合膜片堆叠成具有一定厚度的多层复合膜片,形成三维结构,植入大鼠颅骨缺损模型,术后4周和12周通过Micro-CT、组织学和免疫组化染色分析颅骨缺损的修复效果。细胞层的植入加速了骨基质的钙化,促进了骨小梁的成熟,明显增强了大鼠颅骨缺损的修复能力。同时证实,网格纤维膜构建的细胞层对骨修复性能的促进,也一定程度优于无纺纤维膜构建的细胞层。综上所述,基于静电纺丝可以制备具有不同纤维排布方式的纤维膜,而纤维膜的拓扑学形貌可用于调控细胞行为；基于纳米纤维膜构建的细胞层,在体内外都具有良好的促进细胞增殖、成骨分化和骨修复性能,有望作为一种新型的引导组织再生材料,在牙周和骨组织再生领域有良好的应用前景。