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目的:真菌性角膜炎是一种由致病真菌引起的致盲率极高的感染性角膜疾病。本实验探究了安石榴苷(punicalagin,PUN)在小鼠烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus,A.fumigatus)角膜炎中的作用及其机制。方法:1、纸片扩散法及吸光度测定检测安石榴苷联合两性霉素B对烟曲霉菌的抑制作用,吸光度测定检测不同浓度安石榴苷对烟曲霉菌生长状况的影响,荧光染色标示不同浓度安石榴苷中烟曲霉菌萌发的状态,结晶紫染色统计安石榴苷对烟曲霉菌生物膜形成的抑制作用。2、标准烟曲霉菌菌株感染C57BL/6小鼠角膜,建立小鼠真菌性角膜炎动物模型,培养角膜研磨液真菌菌落,应用平板计数法统计PBS对照组和PUN治疗组小鼠角膜上活菌数。3、采用PCR法和Western blot法检测小鼠感染5天角膜和感染后用药5天角膜炎症相关因子的mRNA表达及蛋白表达。4、流式细胞术检测小鼠感染5天角膜和感染后用药5天角膜巨噬细胞的数量及比例,免疫荧光染色标示角膜内巨噬细胞的数量及浸润深度。5、给予RAW264.7细胞系不同浓度PUN预处理2小时,灭活烟曲霉菌菌丝刺激8小时后,采用PCR法检测各组细胞中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、MIP2、CXCL1等炎症相关因子mRNA表达。6、RAW264.7细胞系不同浓度PUN预处理2小时后,DCFA-DA荧光探针检测灭活烟曲霉菌刺激后0,1,2,4,8,12,24小时细胞ROS产量。结果:1、PUN增加两性霉素B对烟曲霉菌的抑菌环直径。PUN降低烟曲霉菌孢子培养液浑浊程度,荧光显微镜下照片显示PUN干预烟曲霉菌萌发并显著减少烟曲霉菌密度,结晶紫染色显示PUN抑制真菌生物膜形成。2、小鼠角膜烟曲霉菌感染后5天,与PBS对照组相比,PUN治疗组小鼠角膜炎症反应明显减轻,临床评分显著降低;PUN治疗组小鼠角膜研磨液培养出的菌落数量明显降低,差异有统计学意义(P<0.001)。3、与PBS对照组相比,PUN治疗组小鼠角膜IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10、TNF-α、MIP2、CXCL1等炎症相关因子的mRNA表达和IL-1β、TNF-α的蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义(P<0.001)。4、小鼠角膜烟曲霉菌感染2天后,PUN治疗组小鼠角膜中巨噬细胞数量和其在免疫细胞中的比例较PBS对照组减低,差异具有统计学意义(P<0.001)。5、PUN预处理RAW264.7细胞2小时后,由灭活烟曲霉菌菌丝刺激导致的炎症因子升高程度受到抑制,差异具有统计学意义(P<0.001)。6、不同浓度PUN预处理后,在1,2,4,8,12,24h时间点,有灭国烟曲霉菌菌丝刺激导致的RAW264.7细胞ROS产量均较对照组减低,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论:安石榴苷在C57BL/6小鼠烟曲霉菌性角膜炎中可以降低真菌数量,抑制巨噬细胞的数量和分泌炎症因子的功能,从而降低真菌性角膜炎的炎症评分以及抑制炎症相关因子的表达。