论文部分内容阅读
目的:观察一种新的中药方剂对肝部分切除(Partialhepatectomy,PH)后大鼠肝脏再生能力和胃肠运动、屏障功能的影响。方法:健康雄性Sprague-Dawley大鼠通过随机数字表法分为两组:肝纤维化组和正常组,每组48只。肝纤维化组以5ml/kg给予皮下注射40%四氯化碳-橄榄油混合液,每周两次,持续10周,以建立肝纤维化模型;正常组以相同的剂量给予皮下注射生理盐水。纤维化组于建模过程中第2、6、10周自尾静脉取血,离心后留取血清,检测血清中转氨酶、胆红素、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)的水平。成功建模后,肝纤维化大鼠和正常大鼠各分为四组:对照组(Control group,C组)不做手术处理;假手术组(Sham group,S组)利用开腹手术器械游离肝周韧带后关腹;肝部分切除组(Partial hepatectomy group,PH组)开腹后游离肝周韧带、切除肝脏左叶和中叶后关腹;中药干预组(Medicines group,M组)在PH组的基础上围手术期加用中药方剂进行干预。留取肝脏标本进行HE染色、Masson染色和免疫组化检查肝脏内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平,并评价肝纤维化程度。M组大鼠自术前1天至术后第2天或第6天的早晚8点,配制的中药方剂灌胃给药,其它组大鼠则用等剂量生理盐水灌胃,观察大鼠的一般状况、血清转氨酶、胆红素、肝细胞生长因子(HGF)、胃动素水平(MTL)、肝再生率、胃肠运动及黏膜屏障功能的变化。实验期间,记录每组大鼠的活动程度、精神、进饮食情况和大、小便;手术后第2、4、7天自尾静脉取血,离心后留取血清,-80℃储存待检。于手术后第3、7天分别处死各小组大鼠6只,取肝脏标本测量肝重量,以评估肝再生率;免疫组化检测肝脏内增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki-67的表达水平,以评估中药方剂对大鼠PH后肝脏再生能力的影响。采用活性炭凝胶法进行肠推进实验,并用ELISA法测定血清胃动素水平,评估中药复方对胃肠道运动功能的影响;留取肠道标本,行HE染色并测量小肠绒毛高度,免疫组化检测黏蛋白-2(MUC-2)的表达部位及表达量,评估中药方剂对大鼠肠屏障功能的影响。结果:1.肝纤维化模型:建模过程中2、6、10周血清AST、ALT、TBIL、HA、LN水平进行性升高;HE和Masson染色可见肝脏小叶结构破坏、紊乱,大量胶原纤维沉积,假小叶形成;通过对α-SMA的免疫组化染色可见,α-SMA在纤维化肝脏中的表达水平显著增加,表明模型已成功建立。2.PH术后肝功能恢复:肝纤维化和正常大鼠手术后,PH组和M组血清中AST、ALT、TBIL水平均较C组显著升高;手术后第2天,PH组和M组之间AST、ALT和TBIL水平差异无统计学意义(P>0.05);手术后第4、7天M组血清中AST、ALT和TBIL水平较PH组均明显改善,差异有统计学意义(P<0.05)。3.肝脏再生能力:肝纤维化大鼠中,M组大鼠术后第3、7天肝脏再生率较PH组显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);正常大鼠中,手术后第3天,PH和M组之间大鼠肝脏再生率差异无统计学意义(P>0.05),手术后第7天,M组肝脏再生率显著高于PH组,差异有统计学意义(P<0.05)。正常大鼠术后肝脏再生率较肝纤维化大鼠显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。肝纤维化和正常大鼠手术后第2、4、7天,PH和M组HGF水平均较C组和S组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);M组较PH组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。肝纤维化和正常大鼠手术后第3、7天,M组肝细胞PCNA和Ki-67的阳性率均显著高于PH组,差异有统计学意义(P<0.05);正常大鼠PH术后肝细胞PCNA和Ki-67的阳性率较肝纤维化大鼠显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。4.胃肠运动功能恢复:肝纤维化和正常大鼠手术后第3、7天M组大鼠活性炭肠推进指数较PH组均显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);另外,与正常大鼠相比,肝纤维化大鼠活性炭肠推进指数减低,差异有统计学意义(P<0.01)。肝纤维化和正常大鼠手术后第2、4、7天,M组血清中MTL均显著高于PH组,差异有统计学意义(P<0.05)。5.对肠黏膜屏障的影响:HE染色结果显示,肝纤维化和正常大鼠手术后第3、7天,M组大鼠的肠绒毛高度均显著高于PH组,差异有统计学意义(P<0.05);与正常大鼠相比,肝纤维化大鼠肠绒毛高度显著减低,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化检测肠黏膜MUC-2表达可见,肝纤维化和正常大鼠手术后第3、7天,M组MUC-2的表达量均高于PH组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PH围手术期应用本中药方剂可以提高正常和肝纤维化大鼠的肝脏再生能力,同时,还可以促进术后胃肠道运动功能恢复和保护肠黏膜屏障功能。