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目的:1)观察RhoA蛋白1(Rho associated coiled coil forming protein kinase,ROCK-1)在体外培养的人肺动脉平滑肌细胞(Human pulmonary artery smooth muscle cells,HPASMCs)中的表达;2)探讨促进HPASMCs增殖的相关机制中,生存素(Survivin)、ROCK-1二者之间的调控关系。方法:1.取离体人肺周围的正常组织,体外培养至第3-8代。将细胞分组为如下7组:低氧0h(即常氧,37℃,21%O2,5%CO2)组、低氧(37℃、5%CO2、5%O2、90%N2)0.5h组、低氧1h组、低氧2h组、低氧4h组、低氧8h组、低氧12h组,用实时荧光定量PCR(Quantitative realtime-PCR)检测细胞内ROCK-1 mRNA的表达水平,然后用western blotting和免疫荧光检测ROCK-1蛋白质表达的变化,CCK8检测细胞增殖能力。2.原代培养HPASMCs,体外构建合成出3条ROCK-1小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA),并筛选其中1条抑制HPASMCs中ROCK-1信使RNA(Messenger RNA,mRNA)表达效率最高(至少70%)的siRNA靶序列,体外构建合成出1条Survivin siRNA,同理抑制效率至少70%,利用脂质体2000转染细胞,随后将细胞分为6组,即常氧空白对照组、常氧Survivin siRNA组、常氧ROCK-1 siRNA组、低氧空白对照组、低氧Survivin siRNA组、低氧ROCK-1 siRNA组,用realtime-PCR检测细胞内ROCK-1 mRNA及Survivin mRNA的表达水平,然后用western blotting检测ROCK-1及Survivin蛋白质的表达及变化,CCK8和EDU免疫荧光检测细胞增殖能力。结果:1.realtime-PCR方法检测mRNA水平。发现,低氧处理后ROCK-1mRNA表达明显增加(P<0.05),且在低氧4h后表达至高峰(P<0.05);同时应用western blot和免疫荧光检测蛋白表达水平,发现,低氧处理后ROCK-1蛋白表达明显增加(P<0.05),且在低氧4h后达高峰,而CCK8检测在低氧24h、48h、72h后细胞增殖能力均显著增高(P<0.05)。2.Survivin siRNA能下调HPASMCs ROCK-1的mRNA及蛋白表达水平,而ROCK-1 si RNA不能下调HPASMCs中Survivin的mRNA及蛋白表达水平。结论:1.低氧促进HPASMCs增殖。2.低氧可导致HPASMCs中ROCK-1表达增加,提示ROCK-1信号可能参与HPASMCs的增殖。3.Survivin siRNA能抑制ROCK-1在HPASMCs中的表达,反之不然,说明Survivin在HPASMCs增殖信号传导的通路中位于ROCK-1的上游,且Survivin、ROCK-1均促进HPASMCs增殖。