背景:乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤。尽管患者相对预后好,生存期长,但肿瘤的复发和远处转移仍然是导致患者死亡的主要原因。因此,探索疾病发生发展的内在机制,寻求新的治疗靶点,成为研究关注的重点。Micro RNA(miRNA)是最重要的一类nc RNA(non-coding RNAs),与细胞生长、增殖、分化及凋亡等密切相关,在维持细胞稳态中具有重要意义。许多疾病中,miRNA出现异常表达现象,并与疾病的表型相关联,其在癌症中的作用尤为引人关注。miRNA具有多基因调控性,能够调节恶性肿瘤进程中关键基因的表达,导致各种信号通路失常,影响肿瘤的发生发展。越来越多的研究表明,miRNA具有成为生物标志物的潜力,在恶性肿瘤诊断、治疗及预后中发挥作用。目的:通过数据库的筛选发现,miR-1225-5p在乳腺癌中表达升高。虽然在胰腺癌、喉癌中,miR-1225-5p已有相关研究,但乳腺癌中未见文献报道。因此,实验将探索miR-1225-5p在乳腺癌发生发展中的作用,并阐明内在分子机制。方法:1.收集乳腺癌临床组织标本,检测miR-1225-5p的表达量,并分析与预后的关系。2.通过MTT、Ed U、克隆形成及凋亡检测,观察差异表达miR-1225-5p对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响。3.筛选miR-1225-5p靶基因,表达定量及荧光素酶实验验证。恢复靶基因的表达水平,开展细胞营救实验,观察乳腺癌细胞生长的变化。4.免疫缺陷小鼠皮下成瘤实验,观察不同组间肿瘤生长状况。适时解剖,称重测量肿瘤组织。5.Linked Omics网站寻找靶基因ZNF37A的关联基因,DAVID网站富集信号通路。6.Ch IP实验检测ZNF37A与Smad4启动子区的结合,明确二者的调控关系。7.周期实验明确miR-1225-5p对细胞周期的影响,western blot检测周期蛋白变化。8.免疫组化染色靶基因、增殖指标Ki67及周期蛋白指标,观察表达变化。结果:1.miR-1225-5p在乳腺癌组织中高表达,并与不良预后呈正相关。2.过表达miR-1225-5p,促进MDA-MB-231细胞增殖。而降表达miR-1225-5p,抑制MCF-7细胞增殖,促进细胞凋亡。3.ZNF37A为miR-1225-5p的调控靶基因。MDA-MB-231/miR-1225-5p稳系中恢复ZNF37A表达水平,可逆转miR-1225-5p促进乳腺癌细胞增殖的作用。4.体内动物实验,过表达miR-1225-5p的MDA-MB-231细胞肿瘤生长的速度及肿瘤体积、重量均高于对照组细胞。5.转录因子ZNF37A可以与Smad4的启动子区结合,转录激活Smad4的表达,二者表达呈正相关。6.过表达miR-1225-5p的MDA-MB-231细胞S期比例明显升高。蛋白检测可见促进细胞由G1期进入S期的周期蛋白Cyclin D1表达水平升高。7.免疫组化染色,过表达miR-1225-5p组中靶基因ZNF37A及其下游调控基因Smad4表达降低,而增殖指标Ki67和周期蛋白指标Cyclin D1表达升高。结论:miR-1225-5p在乳腺癌组织中高表达,而高表达的miR-1225-5p靶向下调转录因子ZNF37A,进而转录抑制Smad4,导致细胞周期中G1期关键周期蛋白Cyclin D1表达升高,促进细胞由G1期进入S期,发挥促进乳腺癌细胞生长增殖,抑制凋亡的作用。