【摘 要】
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肌球蛋白X（Myosin X, MyoX）是一种只在脊椎动物中表达的非传统的肌球蛋白，它的尾部区域可以特定的与微管相互作用，而微管是构成神经元主要的细胞骨架之一，稳定的微管向前聚集可以帮助神经元轴突的形成，这就暗示着Myosin X可能通过调节微管的稳定性参与到神经元的极性发育过程中。之前我们实验室的研究表明，利用原代海马神经元的培养体系，通过分别电转染scramble siRNA和Myo X s
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肌球蛋白X（Myosin X, MyoX）是一种只在脊椎动物中表达的非传统的肌球蛋白，它的尾部区域可以特定的与微管相互作用，而微管是构成神经元主要的细胞骨架之一，稳定的微管向前聚集可以帮助神经元轴突的形成，这就暗示着Myosin X可能通过调节微管的稳定性参与到神经元的极性发育过程中。之前我们实验室的研究表明，利用原代海马神经元的培养体系，通过分别电转染scramble siRNA和Myo X siRNA质粒，3天后Tau-1免疫荧光染色呈阴性，说明Myo X与轴突形成有关。为了进一步分析微管在Myo X对轴突发育过程中得作用，我们选择乙酰化的微管（Acetylated-tublin）和酪氨酰化的微管（Tyrosinated-tublin）这两个指标做免疫荧光染色，神经元突起上这两种指标的分布情况有变化，证明Myo X可能是通过改变了微管的稳定性，影响了神经元发育的极性。加入GSK3β的抑制剂SB415286也可以补救沉默Myo X导致的Tau-1阴性，诱导出多个轴突，证明Myo X参与PIP3-Akt-GSK3β信号通路，并在GSK3β的上游发挥作用。原代培养神经元分别电转染scramble siRNA和Myo X siRNA质粒后，pGSK3β在神经元轴突末端的聚集状态改变，GSK3β在各个突起上的分布无明显变化，Western Blotting结果表明也表明GSK3β的蛋白表达量并无变化。在神经发育的不同阶段有两种形式的Myo X表达，即无头形式（Myosin XHeadless）和全长形式（Myosin X Fulllength）。本实验针对Myosin X的这两种形式，分别设计并构建出能特异识别无头形式和全长形式的Myosin X的沉默载体并通过荧光素酶双报告系统检测它们的沉默效率。为了以后更加系统、深入的研究两种形式的Myosin X在神经元极性发育的研究中打下基础。
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