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第一部分P-cadherin在不同乳腺病中的差异表及意义
目的:通过研究P-cadherin在乳腺癌及硬化性腺病中表达的不同,探讨P-cadherin在乳腺硬癌和硬化性腺病鉴别诊断中的意义。
方法:采用免疫组化法染色,观察硬癌和硬化性腺病中P-cadherin表达、淋巴结转移与淋巴结非转移病例P-cadherin的表达,利用图像分析系统对P-cadherin在乳腺疾病细胞中的表达强度进行分析。
结果:P-cadherin的表达率在硬癌和硬化性腺病分别为93.3%、100%,差异无显著性意义(p>0.05)。但乳腺癌与硬化性腺病的阳性着色方式明显不同。淋巴结转移与淋巴结非转移病例,P-cadherin的表达量有有显著差异(p<0.05)。
结论:P-cadherin的表达可作为硬癌和硬化性腺病鉴别诊断的参考指标,并对估计淋巴结是否转移有重要价值。
第二部分P-cadherin对乳腺癌细胞浸润性的影响
目的:通过研究P-cadherin与muc1表达的相关性,了解P-cadherin对人乳腺癌细胞浸润性的影响。
方法:
一、人乳腺癌细胞(MCF-7)的培养与分组
以含有15%新生小牛血清的RPMI1640培养基进行封闭培养,将培养至融合状态的细胞随机分为对照组(仅给予RPMI1640培养基)和实验组,实验A、B、C组分别加入不同浓度TAM(三苯氧胺)。A组:加入TAM(10-7mol/L);B组:加入TAM(10-6mol/L);C组:加入TAM(10-5mol/L),6小时后,收取细胞。
二、WesternBlot分析
提取各组总蛋白,用Bradford法测定样品蛋白的浓度,然后在8%SDS-PAGE凝胶上电泳分离,再将蛋白转移至硝酸纤维(NC)膜上.室温振荡封闭后,加入兔抗人P-cd多克隆抗体(北京中山公司)4℃孵育过夜.充分洗涤后,滴加辣根过氧化物酶标记的二抗,37℃孵育1小时。充分洗涤后,加入ECL反应体系,曝光,显影。用英国UVP公司MGIAS-1000多媒体图象分析系统检测NC膜上蛋白质条带的积分光度值(A值)。
结果:WesternBlot分析结果显示,正常对照组人乳腺癌细胞即有基础P-cd,muc1蛋白的表达。与正常对照组相比,TAM能明显抑制人乳腺癌细胞P-cd蛋白的表达,增加muc1蛋白的表达。实验组分别用10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/LTAM干预培养的人乳腺癌细胞6小时,各实验组乳腺癌细胞的P-cd蛋白表达比对照组P-cd的蛋白表达分别降低29.8%,31%,43.6%,各实验组muc1的蛋白表达比对照组muc1的蛋白表达分别增加了18.6%,42%,69.7%。
结论:muc1能够促进细胞间紧密接触,增加细胞间的黏附性,使细胞产生接触抑制,促进细胞分化成熟,抑制细胞无限的分裂增殖,抑制肿瘤细胞的浸润性,P-cdherin表达与muc1蛋白的表达具有负相关性,故推测P-cdherin可能增加肿瘤细胞浸润性。