水稻GRAS转录因子家族基因克隆、遗传转化与功能分析

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本研究利用Gateway克隆技术从水稻日本晴(Oryza. sativa L. cv. Nipponbare)的幼叶、幼穗、根、花器等不同组织中成功克隆得到44个OsGRAS基因,构建到改造后的植物表达载体pCambia1301(包括转录激活表达载体和转录抑制表达载体),将它们在水稻中超量表达,通过观察转基因植株在两种植物表达载体上的表型差异,可以分析GRAS家族各成员的功能。本试验中,成功将GRAS转录因子家族30个基因的NV端转录激活表达载体通过农杆菌介导的方法转化水稻愈伤组织,获得990多个T0代转基因水稻单株,并得到T1代转基因水稻种子。通过对构建到转录激活表达载体上的T1代水稻GRAS转录因子家族基因的田间表型观察,选取具有代表性的三个转基因株系NV-GRAS04-06、NV-GRAS04-11和NV-GRAS34-22的T2代种子进行分子生物学鉴定。通过对hpt基因的PCR检测,发现以167mg/L潮霉素浸种处理后的转基因阳性苗准确率高达93.33%。以包含目的基因左右边界载体序列设计引物,基因组DNA为模板进行PCR检测,经过测序比对,证明DNA水平上GRAS家族基因整合到水稻基因组中。经过Western检测,证明GRAS家族基因在蛋白水平上也有表达。本研究中,OsGRAS34和OsGRAS04两个基因的转录激活超表达载体的T2代转基因株系表现出强烈的表型,苗期在株高和茎粗上面均比野生型有显著提高,并且T1代转基因株系产量也比野生型显著提高。推测OsGRAS34、OsGRAS04这两个基因的功能与株高和产量有关,可能为水稻超高产育种提供新的种质资源。
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