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目的血管生成对肿瘤的生长起着重要的作用，抑制肿瘤血管生成是目前抗肿瘤治疗的主要方法之一。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）是肿瘤生长过程中的重要蛋白，参与调节细胞的代谢和增殖；同时在肿瘤组织血管生成的调控中起着重要作用。前期研究表明小豆蔻明（Cardamonin，CAR）能够靶向作用于mTOR抑制肿瘤生长，但CAR是否影响肿瘤血管生成尚不明确。本课题旨在考察CAR是否通过作用于mTOR靶标抑制肿瘤血管生成，并探讨其可能的机制，为开发以mTOR为靶标的抗肿瘤药物提供实验依据。方法1实验材料体外：人卵巢癌细胞株SKOV3，体内：鸡胚绒毛尿囊膜（chicken embryoallantois membrane，CAM）模型。2分组与给药SKOV3：常氧细胞分为0.1%二甲亚砜（Dimethyl Sulfoxide, DMSO）溶剂对照组，RAP组(10-7mol·L-1)，低剂量CAR组(3×10-6mol·L-1)和高剂量CAR组(3×10-5mol·L-1)； CoCl2(1.5×10-4 mol·L-1)模拟缺氧，缺氧细胞分组与常氧细胞相同。CAM：分为PBS空白组，条件培养液（conditioned medium, CM）模型对照组，RAP组(10-5mol·L-1)，低剂量CAR组(3×10-4mol·L-1)，中剂量CAR组(10-3mol·L-1)和高剂量CAR组(3×10-3mol·L-1)。3测定指标及方法3.1显微镜观察细胞形态3.2MTT法测定细胞增殖3.3半定量RT-PCR法检测缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor1α, HIF1α）、缺氧诱导因子2α（hypoxia-inducible factor2α, HIF2α）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的mRNA表达3.5Western Blot法检测HIF1α、HIF2α、VEGF、mTOR、p-mTOR、S6K1、p-S6K1蛋白的表达3.6CAM血管计数结果1CoCl2模拟缺氧状态下SKOV3细胞增殖受到明显抑制（P <0.01）。在常氧及模拟缺氧状态培养时，CAR可剂量依赖性抑制SKOV3细胞增殖；2CAR抑制mTOR和S6K1活化，显著性降低p-mTOR、p-S6K1的蛋白表达（P<0.01），其中高剂量组CAR的抑制作用较强；而CAR对二者总蛋白的表达无显著性影响；3CAR降低缺氧诱导的HIF1α和HIF2α蛋白表达（P <0.01），高剂量组CAR的抑制作用较弱，且在常氧状态下增强HIF1α表达（P <0.01）；CAR对HIF1α和HIF2α mRNA表达的影响不明显；4在常氧及缺氧状态下，CAR能降低VEGF的mRNA和蛋白表达（P <0.01）；高剂量与低剂量CAR对VEGF mRNA的降低作用无显著差异；而高剂量CAR对VEGF蛋白表达的抑制作用较低剂量CAR强；5CAR可剂量依赖性抑制CM刺激引起的CAM血管生成（P <0.01）。结论1CAR可通过mTOR影响HIF1α、HIF2α和VEGF的表达；2CAR可能以非mTOR依赖的方式影响HIF1α、HIF2α和VEGF的表达；3CAR能够抑制生长因子刺激引起的血管生成。