五味子是木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实,始载于《神农本草经》,具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心等功效。五味子中主要含有木脂素、挥发油、有机酸和多糖等成分,其中木脂素类成分主要有五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素和五味子酯甲等成分。现代植物化学和药理学研究表明五味子果实富含的木脂素类成分,具有降酶保肝、增强肝脏解毒功能等多种作用,主要用于肝病治疗保健,且有较好的临床应用价值和研发潜力。本课题以开发中药五类新药(天然药物中提取的有效部位)为目标,参照国家药品监督局颁布的《新药审批办法》,对五味子中有效活性成分总木脂素进行制备工艺、质量标准、初步稳定性及效应评价等研究,具体研究内容如下:1.五味子总木脂素制备工艺研究本课题以五味子总木脂素的含量、浸出物得率及总木脂素纯度为考察指标,对五味子总木脂素的制备工艺及影响因素进行筛选。首先以提取液中总木脂素的含量及浸出物得率为考察指标,选用L9(34)正交试验表进行实验,考察乙醇浓度、用量、回流时间、次数等,确定最佳提取工艺,即五味子药材碾碎加12倍量80%乙醇,提取2次,每次1.5h,通过了最佳提取工艺验证实验,说明本实验所确定的工艺合理可行,可操作性强。在五味子总木脂素的精制纯化工艺方面,采用单因素与正交试验相结合的方法对五味子总木脂素进行了大孔树脂纯化工艺研究,优选出五味子总木脂素精制工艺为:0.5g/ml生药上AB-8大孔树脂,1BV/h流速吸附,树脂床φ:L为1:7,洗脱的最佳条件为:先采用水、10%乙醇、30%乙醇、和50%的乙醇以2BV/h流速各洗脱6BV,去除杂质后采用70%和90%乙醇以2BV/h流速各洗脱6BV,所得洗脱液减压浓缩、真空干燥即得五味子总木脂素。对优选的制备工艺参数进行了中试放大研究,证明工艺合理可行。采用HPLC法进行含量测定,三批中试实验样品中11个已知木脂素成分加和的总含量>50%,总木脂素转移率>60%。2.五味子总木脂素质量标准研究本课题对五味子总木脂素的质量标准进行了深入研究,包括制法、性状、鉴别、检查、含量测定等。其中鉴别项,参考2010版药典的薄层鉴别方法,以样品中含量较高且为易得对照品的五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素及五味子对照药材为对照,对五味子总木脂素进行了鉴别。含量测定项采用HPLC法,对五味子总木脂素的质量标准进行了深入研究。考察并建立了高效液相法同时测定五味子总木脂素中11种木脂素类成分(五味子醇甲、戈米辛J、五味子醇乙、戈米辛G、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、当归酰戈米辛H、五味子酯乙、γ-五味子素)含量测定的方法,结果11种被测木脂素成分分离度良好;各成分质量浓度与峰面积在测定范围内均呈良好的线性关系(r>0.9995);重现性良好;准确度均在规定范围内,说明本研究所建立的HPLC方法稳定可靠、简便可行,可用于五味子中木脂素类成分的同时定量分析。3.五味子总木脂素初步稳定性研究通过室温留样考察和加速稳定性实验,对五味子总木脂素质量标准项下的性状、鉴别、检查、五味子木脂素类成分含量测定等进行研究,初步考察了本品的稳定性,为制备安全、有效、可控的制剂提供依据。4.五味子总木脂素初步效应评价研究在前期总木脂素制备工艺研究的基础上,进一步研究五味子总木脂素初步的效应评价研究,即五味子总木脂素对小鼠CCl4急性肝损伤模型保护作用及其抗脂质过氧化的作用。五味子总木脂素对小鼠CCl4所致急性肝损伤的影响:将小鼠连续灌胃7天,于第7天给药后1小时造模,16小时后,取血及肝脏。采用全自动生化仪及病理切片等方法系统的评价了五味子总木脂素对小鼠急性肝损伤的保护作用。结果显示,五味子总木脂素对小鼠急性肝损伤具有保护作用。五味子总木脂素抗脂质过氧化的实验研究:以CCl4造成小鼠的肝损伤为模型,测试可反映机体内脂质过氧化程度的丙二醛(MDA)含量为指标,对五味子总木脂素进行实验研究,结果表明,五味子总木脂素具有抗脂质过氧化的作用。本课题通过对五味子总木脂素制备工艺的研究,优化筛选出一条稳定、可控的五味子总木脂素制备工艺路线,制备得到纯度和转移率都较高的五味子总木脂素,并对其进行了质量标准、初步稳定性及效应评价等研究,为五味子五类新药的研发奠定了良好的基础。