【摘 要】
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目的脑缺血再灌注后神经元死亡的主要方式是细胞焦亡,其关键调控基因是Caspase家族中的Caspase-1,已有相关研究证明,电针能下调脑缺血再灌注损伤后细胞焦亡的Caspase-1表达,但其具体调控机制如何尚不完全明确。本研究以Caspase-1基因敲除小鼠为研究对象,观察电针对Caspase-1基因敲除小鼠脑缺血再灌注损伤细胞焦亡的影响并探讨其机理,为临床电针治疗缺血性脑卒中提供科学依据。方法
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（81674048）； 广东省中医药局科研项目（20173012）； 广东省中医药局科研项目（20181094）；
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目的脑缺血再灌注后神经元死亡的主要方式是细胞焦亡,其关键调控基因是Caspase家族中的Caspase-1,已有相关研究证明,电针能下调脑缺血再灌注损伤后细胞焦亡的Caspase-1表达,但其具体调控机制如何尚不完全明确。本研究以Caspase-1基因敲除小鼠为研究对象,观察电针对Caspase-1基因敲除小鼠脑缺血再灌注损伤细胞焦亡的影响并探讨其机理,为临床电针治疗缺血性脑卒中提供科学依据。方法选取Caspase-1基因敲除小鼠、普通野生型C57BL/6小鼠各54只,分为两大组:Caspase-1基因敲除小鼠组（KO）、普通型野生型C57BL/6小鼠组（WT）,每组随机分为假手术组（sham）、模型组（I/R）和电针组（EA）3个亚组,共6组,每组各18只。电针治疗组于造模成功后取患侧肢体“尺泽、合谷”和“足三里、三阴交”四穴进行1次针刺干预,时间20min。采用神经功能缺损评分评估各组小鼠神经功能、TTC染色法形态学观察评价神经细胞损伤程度、TUNEL观察缺血灶细胞焦亡水平、Western blot法检测Caspase-1、GSDMD-N蛋白的表达。结果1.神经功能缺损评分:基因型组（KO）、野生型组（WT）的假手术组评分为0,其余组均表现出不同程度的神经功能缺损症状（P<0.05）。基因型组、野生型组组内比较:与同组的模型组比较,电针组评分下降,差异有统计学意义（P<0.05）。2.TTC染色:5组脑切片患侧均出现不同大小的苍白色梗死灶（P<0.05）。与KO模型组相比,WT组梗死面积较大（P<0.05）。KO、WT组内比较:与模型组相比,电针组梗死体积有所减少（P<0.05）。3.TUNEL染色:假手术组可见极少量焦亡细胞（P>0.05）,与KO模型组相比,WT组焦亡细胞明显较多,差异有统计学意义（P<0.05）。经电针干预后,细胞焦亡指数明显下降（P<0.05）。4.Western Blot检测:与WT相比,KO组各组中Caspase-1蛋白无表达（P<0.05）,GSDMD-N表达明显较低（P<0.05）。WT组内比较:与假手术组相比,模型组Caspase-1、GSDMD-N蛋白水平升高（P<0.05）。电针干预后能使Caspase-1、GSDMD-N蛋白表达水平下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论电针“合谷、尺泽”与“足三里、三阴交”显著减轻脑缺血再灌注后小鼠的神经功能受损情况,改善组织学结果并抑制细胞焦亡,下调Caspase-1、GSDMD-N蛋白水平表达水平,提示电针对脑缺血再灌注损伤起保护作用且该作用至少部分地通过影响Caspase-1表达来介导;其调控机制之一可能是通过“电针刺激—抑制Caspase-1表达-抑制GSDMD-N—抗细胞焦亡—抗脑缺血再灌注损伤”,从而治疗脑血管疾病。
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