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背景和目的:核基质(nuclear matrix NM)是指间期细胞核经非离子去污剂、高盐抽提及核酸酶消化所得到的动态纤维蛋白网状体系。结构上主要包括核孔复合体、核衬层、残余核仁及内纤维颗粒。研究表明,核基质蛋白(nuclear matrix proteins NMPs)在染色质构成、DNA复制、转录及基因表达等一系列事件中具有重要的调节作用;核基质蛋白具有明显组织细胞特异性及肿瘤相关性。本文就膀胱移行细胞癌相关NMPs进行分离、纯化和分析,为研究开发基于国人膀胱癌相关NMPs免疫检测提供理论及实验基础。同时,利用PCR等分子生物学方法,探讨膀胱移行细胞癌中表皮生长因子受体(EGFR)基因和NMPs的相互作用,从而为进一步阐明EGFR基因在膀胱移行细胞癌中的作用机制,为膀胱移行细胞癌防治提供理论基础。 材料和方法:材料为膀胱移行细胞癌等新鲜组织及其相关组织石蜡切片。根据Wen等的改良方法制备膀胱移行细胞癌NMPs,SDS-PAGE电泳分析膀胱移行细胞癌NMPs;紫外扫描分析膀胱移行细胞癌NMPs紫外吸收光谱特征;膀胱移行细胞癌NMPs免疫家兔获得抗血清,硫酸铵沉淀法部分纯化抗血清;western blot分析膀胱移行细胞癌NMPs与其它对照组蛋白组分的差异性;confocal检测膀胱移行细胞癌细胞原位NM、膀胱移行细胞癌石蜡切片及对照组织石蜡切 汕头大学医学晚硕士研史生毕业论文片;分别抽提膀脏移行细胞癌细胞基因组DNA及核基质DNA,设计EGFR基因不同位点的2对探针,PCR分析EGFR基因片段与NMPS的相关性。 结果:western blot及免疫荧光分析发现膀脱移行细胞癌存在组织细胞特异性和肿瘤相关核基质蛋白;PCR分析表明,膀脱移行细胞癌组织中EGFR基因是结合在N’M上,不同的结合位点其结合牢固程度具有差异性,1361叫470位点之间DNA片段结合度较3901叶之间DNA片段小,对DNase敏感度高。 结论1.本研究表明膀跳移行细胞癌存在肿瘤相关及组织细胞特异性NMPS。为开发基于尿液或血液的免疫检测提供了理论基础,对膀眈癌早期诊断和术后复发监测等方面可能具有潜在的应用价值。 2.人膀脏移行细胞癌中,EGFR活性转录基因片段与核基质结合,NMPS可能和 EGFR基因转录或转录后基因调控相关,核基质蛋白对EGFR基因在膀眺移行细胞癌中高表达可能具有重要的调控作用。