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本研究建立了饲料添加剂中游离谷氨酰胺(Glutamine,Gln)和丙氨酰谷氨酰胺(Alanyl-glutamine,Ala-Gln)的高效液相色谱分析方法;以Gln和Ala-Gln为试验材料,用体外培养技术研究了Gln和Ala-Gln对早期断奶仔猪小肠粘膜上皮细胞和肠系膜淋巴结细胞增殖的影响:以Gln和百傲康为试验材料研究了其对28日龄早期断奶仔猪生产性能和血液生化指标的影响,为早期断奶仔猪日粮中利用Gln或Gln二肽作为免疫促进剂,改善仔猪的生产性能提供科学依据。具体研究结果如下: 1.本试验对测定饲料添加剂中游离Gln和Ala-Gln的高效液相色谱分析方法进行研究。采用Spherisorb,C18色谱柱为固定相,OPA为柱前衍生剂,乙腈:磷酸缓冲液(50mmol/L)=6/94为流动相,进行单泵洗脱,激发波长为230nm,发射波长为389nm,荧光检测器检测Gln的含量,结果线性范围为200 μmol/L-6400 μmol/L,线性回归方程为Y=1793.4X+274241,r=0.9999,批内变异系数为1.39%。采用Spherisorb C18色谱柱为固定相,邻苯二甲醛(OPA)为柱前衍生剂,乙腈:磷酸缓冲液(12.5mmol/L)=15/85(pH,4.35)为流动相,进行单泵洗脱。激发波长为338nm,发射波长为450nm。荧光检测器检测Ala-Gln的含量,线性范围为6.25-100mmol/L,线性回归方程为:Y=28186X-9905.1,r=0.9997,批内变异系数为5.33%,回收率为98%。利用此方法测定百傲康中游离Gln和Ala-Gln含量分别为21.1%和2.65%。结果证实本测定方法快速、简单、无需梯度洗脱,分离效果好,灵敏度和精密度较高,可用于饲料添加剂中游离Gln和Ala-Gln二肽分析。 2.研究Gln及Ala-Gln对原代培养仔猪肠上皮细胞增殖的影响。采用胶原酶Ⅺ型和中性蛋白酶Ⅰ型联合作用消化分离肠上皮细胞。将获得的细胞接种于含不同浓度Gln或Ala-Gln的培养基中进行培养,培养72h后,噻唑兰(MTT)显色法测定贴壁生长的肠上皮细胞活细胞数量。采用此方法消化可以快速获得大量有活性的细胞。培养液中Gln浓度大于0.5mmol/L时肠上皮细胞快速增殖。Ala-Gln浓度在0.25mmol/L时具有显著的促进作用,增加浓度至2mmol/L时,细胞增殖率达到最大。同浓度Gln和Ala-Gln组差异不显著(p>0.05)。结果表明Gln和Ala-Gln均可以刺激体外原代培养的仔猪肠上皮细胞增殖,且作用相似。 3.采用体外淋巴细胞转化试验研究Gln及Ala-Gln对早期断奶仔猪肠系膜淋巴结细胞增殖的影响。摘取28日龄断奶仔猪肠系膜空、回肠淋巴结,分离淋巴细胞,接种于含不同浓度Gln或Ala-Gln的培养液中进行培养,37℃培养72h后,MTT法测定细胞增殖。Gln浓度为2mmol/L时,淋巴细胞刺激指数最大;Ala-Gln浓度为1mmol/L时,淋巴细胞刺激指数最大。增加Gln或Ala-Gln浓度并没有增加其效应。在一定的华中农业大学2004届硕士学位论文浓度范围内Ala-Gln与Gln对于细胞培养液中MLN细胞增殖的作用相似。本试验表明Gin和Ala一Gln均可以促进丝裂原PHA刺激的淋巴细胞增殖,在一定浓度范围内Ala一Gln可以发挥Gln的作用。 4.选择大长母猪所产仔猪42头,公母各半,仔猪28日龄一次性断奶后随机分为3组,每组2个重复,每个重复7头,仔猪进行单因子试验设计,试验组分别添加0.7%Gln和l%百傲康。研究日粮添加Gln和百傲康对早期断奶仔猪生产性能、腹泻率和血液生化指标的影响。添加Gln和百傲康对日增重、采食量、料肉比、腹泻率和血清总蛋白影响不显著沙0.05),但可以降低断奶后第2天血清尿素氮水平印<。.1),显著降低血清皮质醉浓度勿<0 .05)旧粮添加Gln可以维持血浆Gln水平印<0 .05)。结果表明日粮添加Gin和百傲康可以缓解早期断奶仔猪应激,。