论文部分内容阅读
目的探讨姜黄素诱导的类泛素激活酶E1(UBE1L)下调表皮生长因子受体(EGFR)的机制。方法免疫印迹检测细胞和肺癌组织中蛋白表达；反转录酶-聚合酶链锁反应检测UBE1L和EGFR的mRNA;免疫共沉淀检测EGFR和ISG15的结合；流式细胞术和细胞免疫荧光检测EGFR膜内化。结果在人支气管上皮细胞系Beas-2B细胞和人肺腺癌A549细胞中,证实姜黄素可以下调EGFR蛋白表达水平。在Beas-2B细胞中,首次发现姜黄素可以诱导UBEIL的表达。在Beas-2B细胞中,过表达UBEIL降低EGFR的蛋白水平。UBEIL不仅促进EGFR膜内化,还促进EGFR和ISG15复合物的形成。姜黄素下调EGFR下游信号蛋白p-AKT和NF-κB。在Beas-2B细胞中,过表达或者低表达UBEIL,相应的下调或者上调PI3K/AKT/NF-κB。在非小细胞肺癌组织和癌旁组织中,UBEIL和EGFR-AKT-NF-κB的表达存在着相反的关系。结论以上结果揭示姜黄素新的化学预防机制,在人支气管上皮细胞系Beas-2B细胞中姜黄素通过诱导UBEIL下调EGFR的信号通路。目的姜黄素、EGCG、白藜芦醇对类泛素激活酶E1(UBE1L)双向调节机制的研究。方法免疫印迹检测细胞中类泛素激活酶E1(UBEIL)、p-JNK、JNK、Nrf2蛋白表达；反转录酶-聚合酶链锁反应检钡UBEIL的mRNA水平；流式细胞术检测人支气管上皮细胞中ROS的变化。结果在人支气管上皮细胞Beas-2B细胞中,低浓度的姜黄素、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、白藜芦醇诱导UBEIL的蛋白表达,而高浓度的姜黄素、EGCG、白藜芦醇则抑制UBE1L的蛋白表达。已知多酚类在低浓度时表现出抗氧化特性,而在高浓度时表现出促氧化性质。实验结果证明低浓度的姜黄素、EGCG、白藜芦醇使细胞内ROS水平降低,而高浓度的姜黄素、EGCG、白藜芦醇使细胞内ROS水平升高。为了验证ROS参与多酚调节UBEIL的表达,分别用抗氧化剂NAC,氧化剂H2O2和tBHP处理细胞。抗氧化剂NAC诱导UBEIL蛋白表达上调,而氧化剂H202和tBHP使UBEIL蛋白表达下调。姜黄素和NAC联用比姜黄素和NAC单独处理细胞诱导UBEIL作用增强,而姜黄素可以部分逆转tBHP引起的UBE1L的下调。MAPK抑制剂处理细胞,发现只有抑制JNK可以下调UBE1L的表达。不同浓度的姜黄素、EGCG、白藜芦醇处理Beas-2B细胞,发现低浓度的姜黄素、EGCG、白藜芦醇诱导p-JNK表达,而高浓度的姜黄素、EGCG、白藜芦醇下调p-JNK表达。当siRNA敲减Nrf2, UBEIL蛋白表达下降。结论不同浓度的多酚通过JNK/Nrf2/ROS通路对UBE1L双向调节。目的研究姜黄素激活RARβ的表达的机制研究。方法免疫印迹检测细胞和肺癌组织中RARβ蛋白表达；反转录酶-聚合酶链锁反应检测RARβ的mRNA;甲基化特异性-聚合酶链锁反应检钡RARβ启动子区甲基化水平。结果RARβ在肺癌组织和肺癌细胞中低表达。姜黄素和DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-dC诱导肺癌细胞A549和H460细胞中RARβ的蛋白和nRNA表达上升。姜黄素和5-Aza-dC使肺癌细胞A549和H460细胞中RARβ启动子区甲基化水平降低。在其他检测的细胞中姜黄素也可以诱导RARβ的蛋白水平。姜黄素抑制DNA甲基转移酶3b的mRNA水平。结论姜黄素通过抑制DNA甲基转移酶3b,使RARβ启动子区甲基化水平降低,激活RARβ的表达。为姜黄素作为肺癌的化学预防提供新的分子机制。