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背景与目的:重组组织型纤溶酶原激活剂(recombinant tissue-type plasminogen activator,rt PA)是首个被美国FDA推荐用于急性缺血性脑卒中患者早期静脉溶栓的药物。但由于其4.5小时治疗时间窗的限制,以及随着缺血时间的延长,溶栓治疗后可能发生的并发症如出血转化发生的几率也随之提高,限制了其临床广泛应用。远隔缺血预处理(remote ischemic preconditioning,RIPC),是指在周围远端器官进行短暂的缺血/再灌注处理,使远隔器官或组织对以后发生严重的缺血损伤具有一定抵抗力。本研究旨在探究远隔缺血预处理是否能够改善血栓性脑卒中大鼠接受时间窗内、外的溶栓治疗后,发生的血脑屏障(blood brain barrier,BBB)功能破坏,如通透性改变、溶栓后出血转化风险、脑组织梗死体积、影响神经功能缺损情况等,以及远隔缺血预处理发挥神经保护作用的具体机制。方法:选取432只300-350g雄性SD大鼠并随机分为RIPC+rt PA组及rt PA组,RIPC+rt PA组大鼠在造模前连续接受7天RIPC处理(早晚各一次),rt PA组大鼠在造模前仅接受7天相同时间的麻醉处理。本研究分为2部分,第一部分在第8天对RIPC+rt PA组及rt PA组大鼠进行血栓性脑卒中模型制备,造模成功的大鼠(240只)在造模后3h、5h、7h接受rt PA溶栓治疗,分为3h RIPC+rt PA组,3h rt PA组,5h RIPC+rt PA组,5h rt PA组,7h RIPC+rt PA组,7h rt PA组共6组。第二部分为探究RIPC发挥神经保护功能的具体机制,在第8天对RIPC+rt PA组及rt PA组大鼠进行静脉注射(intravenous,iv.)以及侧脑室定位注射(lateral ventricular injection,icv.)血小板衍生生长因子(platelet derived growth factor-C,PDGF-C)蛋白,同时设立NS对照组,而后立即进行血栓性脑卒中大鼠模型制备,选取造模成功的大鼠(120只)在造模后5h接受rt PA溶栓治疗,分为NS组,PDGF-C(iv.)组,RIPC+NS组,RIPC+PDGF-C(iv.)组,RIPC+PDGF-C(icv.)组共5组。同时纳入24只大鼠并随机分为4组,不进行脑卒中模型制备。sham组不接受任何处理,RIPC组接受7天RIPC处理,RIPC+rt PA组在接受7天RIPC处理后12h静脉注射rt PA,rt PA组在7d+12h时间点静脉注射rt PA,分别在1d、7d、7d后24h进行血液采集并进行分析;本研究中采用Longa评分法、抓握实验、爬梯实验对各组大鼠进行神经功能学评分,TTC染色方法计算大鼠脑梗死体积,Western blot法分析Claudind5、Occludin、ZO-1、Laminin、PDGFRα(platelet derived growth factor receptorα)以及p-PDGFRα(phosphorylation platelet derived growth factor receptorα)的表达情况,Evan’s blue法评估血脑屏障功能损伤情况,检测血红蛋白含量评估溶栓后出血转化情况,ELISA法检测血液中PDGF-CC蛋白含量。结果:1、与rt PA组相比,RIPC+rt PA组大鼠在接受3h/5h/7h溶栓后,脑梗死体积分别下降6.1%(P<0.001)、4.2%(P<0.05)和8.3%(P<0.001);溶栓后的1/3/7天,RIPC+rt PA组大鼠的神经功能缺损情况较rt PA组大鼠均有改善,差异有统计学意义。2、与rt PA组相比,3h RIPC+rt PA组大鼠Evan’s blue渗透量下降(P<0.05),5h/7h组的RIPC+rt PA组大鼠Evan’s blue渗透量下降(P<0.01);在3h/5h/7h三个溶栓时间点中,RIPC+rt PA组大鼠脑组织血红蛋白含量较rt PA组大鼠均有下降,其中5h两组间差异有统计学意义(P<0.05);与rt PA组大鼠相比,三个溶栓时间点中RIPC+rt PA组大鼠的Claudin5,Occludin,Laminin,ZO-1蛋白表达水平均有下降。3、RIPC+rt PA组大鼠在接受3/5/7h溶栓,24h后血液中PDGF-CC的含量均低于rt PA组大鼠(P<0.01);3h RIPC+rt PA组大鼠缺血侧脑组织中p-PDGFRα蛋白的表达含量低于rt PA组大鼠(P<0.01),5h RIPC+rt PA组大鼠缺血侧脑组织中p-PDGFRα蛋白的表达含量低于rt PA组大鼠(P<0.05),7h两组间的p-PDGFRα蛋白的表达含量差异无统计学意义(P>0.05)。4、与RIPC+NS组相比较,RIPC+PDGF-C(iv.)组缺血侧脑组织中Evan’s blue渗透量及血红蛋白含量均增加(P<0.05),RIPC+PDGF-C(icv.)组缺血侧脑组织中Evan’s blue渗透性及血红蛋白含量增加(P<0.001);与NS组相比,PDGF-C(iv.)组缺血侧脑组织中Evan’s blue渗透性及血红蛋白含量降低(P<0.05)。5、与RIPC+NS组相比较,RIPC+PDGF-C(icv.)组、RIPC+PDGF-C(iv.)组缺血侧脑组织的p-PDGFRα的表达水平均升高(P<0.05);与NS组相比较,RIPC+PDGF-C(icv.)组缺血侧脑组织的p-PDGFRα的表达水平升高(P<0.05),RIPC+NS组的p-PDGFRα的表达水平降低(P<0.05)。6、在未进行脑缺血模型的正常大鼠中,接受1天RIPC处理后,RIPC组外周血中PDGF-CC含量较sham组降低(P<0.05),且不呈现时间依赖性;与sham组相比较,RIPC组脑组织中p-PDGFRα蛋白表达水平降低,但差异无统计学意义(P>0.05);与rt PA组相比较,RIPC+rt PA组的脑组织中p-PDGFRα蛋白表达水平显著降低(P<0.001)。结论:1、RIPC能够改善血栓性脑卒中大鼠时间窗内及超窗溶栓后的神经功能缺失以及血脑屏障功能。2、RIPC可降低大鼠血液中PDGF-CC含量,且不呈时间依赖性。3、RIPC改善血栓性脑卒中大鼠溶栓后血脑屏障功能的机制可能是通过抑制PDGF-CC/PDGFRα信号通路而实现的。