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目的:
探索一种简便、经济实用的成年大鼠嗅球成鞘细胞(olfactoryensh-eathingcells,OECs)的分离、培养及纯化方法。
方法:
选取2-3月的成年SD大鼠,无菌条件下取下嗅球(olfactorybulbOB),用眼科剪将OB剪碎,采用酶消化法和组织块培养法,在含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中进行培养,利用差速贴壁法结合无血清饥饿培养法对培养的细胞进行纯化,并对培养所得的细胞行神经生长因子受体(p75NGFR)及DAPI的免疫荧光鉴定,并计算OECs的纯度。
结果:
通过酶消化法和组织块培养法,结合差速贴壁法和无血清饥饿培养法,可获得纯度70%-80%的OECs,显微镜下观察细胞形态,以双极和三极细胞为主,亦有少许多极及梭形细胞,神经生长因子受体(p75NGFR)免疫组化呈阳性。
结论:
应用差速贴壁法与无血清饥饿培养法相结合进行成年大鼠OECs原代培养,纯化是一种简便经济实用的方法,可获得高纯度的OECs。