论文部分内容阅读
目的 探讨增龄因素对耐药克雷伯杆菌肺炎大鼠内环境的影响,并从内环境改变评价中药复方黄白耐克对老龄大鼠耐药克雷伯杆菌肺炎的疗效,并初步探讨其作用机制。 方法 青年SD大鼠,28只,老龄SD大鼠,70只,随机分为青年对照组、青年模型组、老龄对照组、老龄模型组、左氧氟沙星组(简称左氧组)、黄白耐克组、黄白耐克联合左氧组(简称联合组)。实验第1、2d给予青年对照组、青年模型组、老龄对照组和老龄模型组生理盐水灌胃,左氧组给予左氧氟沙星(31.64mg·kg-1·d-1),黄白耐克组给予黄白耐克(6.268g·kg-1·d-1),联合组给予黄白耐克和左氧联合灌胃；第3d采用一次性气管插管注入菌液法制作耐药克雷伯杆菌肺炎大鼠模型(造模当天不灌胃)；造模后继续给予生理盐水至第 9d取材。观察大鼠一般情况,死亡率,第4、8d体温,含水量,肺组织病理；测定外周血白细胞(white blood cell, WBC)计数和中性粒细胞比率,支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中炎症细胞(淋巴细胞、中性粒细胞、肺巨噬细胞)比率；采用酶联免疫吸附试验( enzyme-linked immunoadsordent assay,ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(tumor Necrosis Factor,TNF)-α和BALF中的髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平；采用免疫组化法检测肺组织中谷胱甘肽过氧化物酶-4(glutathione peroxidase,GPX-4)和 4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)水平。 结果 1 一般情况、死亡率、体温及含水量老龄与青龄模型组均表现出不同程度的烦躁,呼吸急促,老龄模型组甚至出现呼吸困难。老龄模型组大鼠死亡率(42.86%)较老龄对照组(0)明显增高(P<0.01),青年模型组(14.29%)死亡率较青年对照组(0)有增长趋势(P>0.05),老龄模型组大鼠死亡率较青年模型组有增长趋势(P>0.05)。模型组(42.9%)较对照组(0)、黄白耐克组和联合组死亡率(0)升高(P<0.01),较左氧组有升高趋势(P>0.05)。 第4、8 d,老龄对照组较青年对照组体温偏低(P<0.01),老龄模型组较老龄对照组体温升高(P<0.01)；第4 d,青年和老龄模型组较青年和老龄对照组体温升高(P<0.01),三个治疗组和老龄模型组较对照组体温升高(P<0.01)；第8 d,青年和老龄模型组较青年和老龄对照组体温升高(P<0.05,P<0.01),联合组较模型组体温降低( P<0.01 ),老龄模型组较青年模型组体温升高(P<0.01)。 老龄对照组含水量较青年对照组增多(P<0.05)；青年和老龄模型组含水量较青年和老龄对照组显著增多(P<0.01)；老龄模型组含水量较青年模型组增多(P<0.01),三个治疗组含水量较模型组降低(P<0.01)；黄白耐克组较左氧组含水量降低,联合组较黄白耐克组降低(P<0.01)。 2 肺脏病理青年对照组肺组织形态大致正常；老龄对照组肺泡囊、肺泡管扩张,肺上皮退行性变,肺泡壁轻度增厚；青年模型组可见肺组织被破坏,肺泡囊、肺泡管扩张,各级支气管周围、小叶间和肺泡间隔的结缔组织血管周围大量的炎性细胞浸润,肺泡壁明显增厚；老龄模型组大鼠肺脏病理损伤严重,肺组织大部分被破坏,肺泡、支气管周围有大量的炎性细胞浸润,肺泡壁明显增厚。黄白耐克组、左氧组和联合组肺部病理损伤较轻,可见肺泡壁较少量断裂或增厚,大量肺泡融合,细支气管壁可见中性粒细胞浸润,肺泡壁、肺泡腔可见少量红细胞,毛细血管扩张,充血。 3 外周血WBC计数和中性粒细胞比率老龄对照组外周血WBC计数和中性粒细胞比率较青年对照组数值升高(P<0.01)；老龄和青年模型组较老龄和青年对照组升高(P<0.01)；老龄模型组较青年模型组升高(P<0.01)。三个治疗组WBC计数和中性粒细胞比率较模型组升高(P<0.01),黄白耐克组较左氧组升高(P<0.01),联合组较黄白耐克组升高(P<0.01)。 4 BALF中炎性细胞分类比率老龄对照组BALF中中性粒细胞比率较青年对照组升高(P<0.01),淋巴细胞比率较青年对照组降低(P<0.01)；老龄和青年模型组中性粒细胞比率、肺巨嗜细胞比率较老龄和青年对照组升高(P<0.01),淋巴细胞比率较老龄和青年对照组降低(P<0.01)；老龄模型组中性粒细胞比率较青年模型组升高(P<0.01),淋巴细胞比率较青年模型组降低(P<0.01)。黄白耐克组、联合组和左氧组中性粒细胞、肺巨嗜细胞、淋巴细胞比率均较模型组降低(P<0.01)。 5血清中IL-6、TNF-α、IL-10水平老龄对照组血清中IL-6、TNF-α较青年对照组升高(P<0.05),IL-10较其降低(P<0.01)；老龄和青年模型组 IL-6、TNF-α 和 IL-10 较老龄和青年对照组升高；老龄模型组IL-6、TNF-α较青龄模型组升高(P<0.01)。三个治疗组IL-6、TNF-α、IL-10较模型组降低(P<0.01)；黄白耐克组IL-6、TNF-α较左氧组降低(P<0.01),IL-10较左氧组升高(P<0.01)；联合组IL-6、TNF-α较黄白耐克组降低(P<0.01),IL-10较左氧组升高(P<0.01)。 6 BALF中MPO、SOD、MDA水平老龄对照组BALF中MPO和MDA较青年对照组升高(P<0.01),SOD较青年对照组降低(P<0.01)；老龄和青年模型组MPO、SOD、MDA较老龄和青年对照组升高(P<0.01)；老龄模型组MPO和MDA较青年模型组升高(P<0.01), SOD 较其降低(P<0.01)。三个治疗组 MPO、SOD、MDA 均较模型组下降；黄白耐克组MPO和MDA较左氧组降低(P<0.01),SOD较左氧组升高(P<0.01)；联合组 MPO 和 MDA 较黄白耐克组降低(P<0.01),SOD 较黄白耐克组升高(P<0.01)。 7 肺组织中4-HNE、GPX-4水平老龄对照组肺组织 GPX-4 表达面积及光密度值较青年对照组降低(P<0.01),4-HNE的表达面积和光密度值较青年对照组升高(P<0.05,P<0.01)；老龄和青年模型组 4-HNE和 GPX-4表达面积及光密度值较老龄对照组和青年对照组升高(P<0.01)；老龄模型组 4-HNE 的表达面积和光密度值均较青年模型组升高(P<0.01),GPX-4较青年模型组降低(P<0.01)。三个治疗组GPX-4表达面积和光密度值较模型组降低(P<0.01),黄白耐克组 4-HNE 表达面积和光密度值较模型组降低(P<0.01,P<0.05),联合组和左氧组 4-HNE 表达面积和光密度值水平较模型组降低(P<0.01)；联合组4-HNE表达面积和光密度值较黄白耐克组和左氧组升高(P<0.05),GPX-4表达面积和光密度值较黄白耐克组和左氧组降低(P<0.01)。 结论 1.增龄因素可加重耐药细菌性肺炎大鼠的炎性反应和氧化应激程度。 2.黄白耐克及其与左氧氟沙星联合应用可以明显改善耐药细菌性肺炎老龄大鼠的一般状况、肺组织病理损害,具有显著的疗效,且黄白耐克与左氧氟沙星联合效果更佳。 3.黄白耐克及其与左氧氟沙星联合应用可显著降低炎症因子MPO、IL-6、IL-10、TNF-α 的表达,提示黄白耐克及其联合应用的疗效机制可能与降低炎性反应有关,且黄白耐克与左氧氟沙星联用效果更佳。 4.黄白耐克及其与左氧联合应用可抑制脂质过氧化作用,并提高抗氧化能力,表明黄白耐克及其联合应用治疗老龄耐药细菌性肺炎的疗效机制同时表现在调控体内氧化应激反应平衡方面,且黄白耐克与左氧氟沙星联合效果更佳。