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黄瓜、西瓜、甜瓜等瓜类是我国非常重要的经济作物,作为水果蔬菜为人们提供丰富的维生素、糖分、蛋白质等营养物质,是人们日常生活的必需品。瓜类褪绿黄化病毒（Cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV）作为长线形病毒科（Closteroviridae）毛型病毒属（Crinivirus）的新成员,系统侵染黄瓜、西瓜、甜瓜等瓜类,导致其叶片褪绿黄化,座果率下降,严重影响瓜类的产量和品质,造成巨大的经济损失。CCYV作为新报道的病毒,各方面研究较少,目前没有对病毒编码蛋白功能的相关研究。本实验通过酵母双杂交对CCYV编码的蛋白自身互作进行研究,明确CCYV编码蛋白自身互作情况,并确定互作功能域;通过双分子荧光互补（bimolecu Lar fluorescence complementation,BIFC）验证与CCYV P22蛋白互作的寄主因子,并对寄主进行功能分析。主要研究内容和结果如下:将CCYV编码的P6,P22,P4.9,Hsp70,P6.5,P59,P9,CP,CPm和P26共10个病毒蛋白基因分别构建到酵母双杂交载体p GADT7和p GBKT7上。对10个病毒蛋白进行酵母单转自激活检测,结果发现P22蛋白有自激活,因此P22不能用于酵母双杂交实验。将其它9组重组质粒进行酵母共转化验证,共81个组合,结果表明81个组合中只有P9和P59存在自身互作;将P9和P59蛋白基因全长序列分为3段分别构建到PGADT7载体上,分别与PGBKT7P9和PGBKT7P59进行酵母共转,结果只有P59517–1032与P59全长存在互作,而P9的3段缺失突变体3段与P9全长都不能互作。将黄瓜M2（Cucumis sativus SKP1-like protein 1A）和Rpol（Cucumis sativusribosome-like protein）以及P22全长阅读框分别构建到BIFC载体,共浸润本生烟后进行荧光观察,结果表明p SPYCE-35SP22与p SPYNE-35SM2和p SPYNE-35SRpol共浸润本生烟均可观察到荧光。通过黄瓜原生质体共转化BIFC载体进行荧光观察发现P22与M2和Rpol在黄瓜原生质体中也存在互作,互作定位在细胞质。将M2和Rpol的GFP融合载体转化黄瓜原生质体进行亚细胞定位研究,结果表明M2和Rpo I在细胞中均定位在细胞质。通过实时荧光定量PCR分析黄瓜不同组织M2和M39的特异性表达,结果表明两者在检测的不同组织中均能表达,M2在雄花中表达量最高,M39在下叶表达量最高。此外,通过检测CCYV侵染黄瓜12天和24天M2的表达水平可以发现M2下调表达。从NCBI上查找M2的同源蛋白Cs SKP1B3（Cucumis sativus SKP1-like protein 1B3）、Cs SKP14（Cucumis sativus SKP1-like protein 14）、Cs SKP21（Cucumis sativus SKP1-like protein21）,同源性分别为69.87%,54.14%,41.03%。将P22-303、P22-304分别与M2同源蛋白Cs SKP1B3、Cs SKP14、Cs SKP21以及M2-C、M2-N,M39（Cucumis sativus SKP1-like protein1B）分别进行酵母共转验证,结果P22-303分别与Cs SKP1B3和Cs M39（Cucumis sativus SKP1-like protein 1B）有互作,其它均无互作。通过点突变P22的F-box功能域获得P22的3个突变体:P225354a（突变第53,54个氨基酸）,P22Del（缺失53-57个氨基酸）以及P22-303的3个突变体:P22-303/53a,P22-303/5354a,P22-303/Del。酵母共转验证P22突变体和P22-303突变体与M2,Rpol互作,结果表明P22突变体与Rpol均有互作,与M2均无互作,说明P22 F-box功能域对于互作是必不可少的。为了确定F-box功能域对P22致病性的影响,将P22,P2253a,P225354a,P22Del构建到PVX载体上,转化农杆菌浸润本生烟观察致病性。症状观察表明PVXP22致病性明显强于PVX,P22突变体致病性低于或与PVX一致,进一步通过Northern blot检测了PVX侵染情况。