研究背景食管癌在全世界男、女性癌症死亡率中分别排第5位和第8位,而我国的食管癌病人约占世界的1/2。大部分病人诊断时已是中晚期,目前的治疗手段均不能获得很好的疗效。放疗在食管癌治疗中占有重要地位,而食管癌的放射抵抗性是影响其疗效的关键因素。研究显示EGFR与食管癌放射抵抗性密切相关。约68.2%食管鳞癌和32%食管腺癌中均存在EGFR过表达,其过表达与不良预后相关。尼妥珠单抗是一种人源化的单克隆抗体,其疗效与其它抗EGFR抗体相同或更好,且副作用轻微,无严重的皮肤、肾脏和胃肠粘膜等毒性,安全性优于其它单抗。然而,目前尚无尼妥珠单抗在逆转放射抵抗食管癌细胞中所起的作用及相关机制的相关研究,本研究中,我们对此进行了探讨,并提出了尼妥珠单抗作为放射抵抗食管癌放射增敏剂的潜在价值和深远的临床意义。实验方法及结果1放射抵抗食管癌KYSE-150R细胞和食管癌KYSE-150细胞在放疗前后的EGFR及p-EGFR表达变化研究EGFR及p-EGFR在食管癌KYSE150及KYSE150R细胞中的表达情况对于建立以EGFR传导通路抑制为靶点的放射增敏的策略是非常必要的。我们以食管癌KYSE150及放射抵抗KYSE150R细胞为研究对象,通过West blot检测EGFR及p-EGFR在上述2种细胞放疗前后的表达情况,发现放疗后2种细胞的p-EGFR表达均较放疗前增加,但放射抵抗KYSE150R细胞中p-EGFR表达增加的更明显,而EGFR表达在2种细胞及放疗前后均无明显差异。说明EGFR传导通路的激活可能与KYSE150R细胞放射抵抗相关,建立了EGFR传导通路抑制作为放射增敏靶点的必要性及潜在的价值。2EGFR抑制剂尼妥珠单抗增强了放射抵抗食管癌KYSE-150R细胞的放疗敏感性EGFR抑制剂可以提高肿瘤细胞的放射敏感性,尼妥珠单抗是一种人源化的单克隆抗体,其疗效与其它单克隆抗体相同或更好,而安全性更优。因此,我们选择尼妥珠单抗作为研究对象,通过克隆生存实验、细胞增殖抑制实验证实了尼妥珠单抗作用于放射抵抗食管癌KYSE-150R细胞后其对放疗的敏感性明显增加,逆转了食管癌KYSE-150R细胞的放射抵抗性。3EGFR抑制剂尼妥珠单抗逆转放射抵抗的食管癌KYSE-150R细胞放射敏感性的机制研究研究尼妥珠单抗放射增敏机制对于指导其临床应用具有重要意义。本研究中,我们通过γ-H2AX焦点分析法检测了尼妥珠单抗对放射抵抗食管癌KYSE-150R细胞的DNA双链断裂(DSBs)修复动力学的改变,证明尼妥珠单抗可能通过延迟放疗后的DSBs修复起到放射增敏作用。结论1、首次研究了p-EGFR在放射抵抗食管癌KYSE150R细胞放疗前后的表达情况,证明了放疗后KYSE150R细胞中p-EGFR表达增加较KYSE150更明显,可能是其放射抵抗产生的原因之一,我们提出在放射抵抗的食管癌KYSE150R细胞中,使用EGFR抑制剂逆转其放射抵抗性的治疗策略有重要临床意义。2、使用尼妥珠单抗抑制EGFR传导通路,在体外实验中证明尼妥珠单抗可以增加食癌KYSE150R细胞对放射线的敏感性,逆转其放射抵抗性。3、首次研究了尼妥珠单抗作用于食癌KYSE150R细胞后对其放疗后DNA损伤修复的影响,证明了尼妥珠单抗逆转食癌KYSE150R细胞放射抵抗性可能通过显著延迟电离辐射诱导的DNA损伤修复实现。本研究证明了EGFR抑制剂尼妥珠单抗作为放射抵抗食管癌KYSE150R放射增敏剂的可行性,为尼妥珠单抗用于放射抵抗食管癌病人提供了体外实验依据。