补骨脂素与异补骨脂素对牙周病抗菌、抗炎及成骨作用研究

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目的观察补骨脂素和异补骨脂素对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)的抗菌作用及其对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,h PDLCs)和THP-1细胞的抗炎作用;研究补骨脂素和异补骨脂素对h PDLCs的成骨作用及机制,并观察异补骨脂素对牙周炎模型小鼠的保护作用。从而为补骨脂素和异补骨脂素用于牙周炎治疗和预防提供理论依据。材料与方法1、采用二倍稀释法、结晶紫染色、MTT法和激光共聚焦显微镜观察补骨脂素和异补骨脂素对P.gingivalis浮游菌和生物膜的影响。2、通过MTT法、RT-PCR和ELISA技术检测补骨脂素和异补骨脂素对h PDLCs和THP-1细胞炎症因子表达的影响。然后检测异补骨脂素对TLR4-IRAK4-NF-κb、EGFR-AKT信号通路及雌激素受体在THP-1细胞中表达的影响。3、采用碱性磷酸酶染色法、western blot技术和RT-PCR技术检测两种药物对h PDLCs的成骨活性影响及异补骨脂素对Wnt信号通路和雌激素受体中的影响。利用P.gingivalis LPS龈沟注射造小鼠牙周炎模型,并给予小鼠龈沟注射异补骨脂素四周,通过micro-CT分析小鼠牙糟骨吸收的情况。结果1、补骨脂素和异补骨脂素对P.gingivalis浮游菌和生物膜表现出明显的抑制作用。2、补骨脂素和异补骨脂素可以显著下调LPS诱导THP-1细胞和h PDLCs细胞IL-1β和IL-8的表达水平。异补骨脂素的抗炎作用与TLR4-IRAK4-NF-κb、EGFR-AKT信号通路和雌激素受体有关。3、补骨脂素和异补骨脂素对h PDLCs表现出显著的成骨诱导作用。其成骨诱导作用与Wnt信号通路和雌激素受体有关。P.gingivalis LPS可以显著诱导小鼠牙周组织炎症,造成小鼠牙槽骨丧失;异补骨脂素可以缓解P.gingivalis LPS诱导的牙槽骨丧失。结论补骨脂素和异补骨脂素对牙周致病菌P.gingivalis具有显著的抗菌作用,可以抑制P.gingivalis LPS诱导的炎症反应,还可促进人牙周膜细胞的成骨向分化,对牙周炎小鼠具有保护作用,提示补骨脂素和异补骨脂素具有用于牙周炎预防和治疗的潜在可能。
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