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间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一类具有跨胚层分化潜能和高度自我复制能力的组织干细胞,具有取材方便、易分离纯化、免疫原性低、能够向肿瘤迁移等特性。MSCs最初在骨髓中发现,本世纪初有研究者从皮肤真皮组织中分离得到了MSCs,并将其命名为真皮间充质干细胞(dermis mesenchymal stem cells,DMSCs),DMSCs具有取材方便、来源广泛和促进造血恢复等独特优势,而且DMSCs具有广泛的潜在的临床应用前景,不仅可以用于皮肤和神经损伤的修复,还可应用于抗皮肤衰老及皮肤组织工程,更利于自体移植,使其成为干细胞治疗的重要的种子细胞。基于此,本实验旨在建立小鼠DMSCs体外快速分离、稳定扩增体系,并探索其多向分化潜能,为DMSCs的临床应用提供理论基础和实验依据。取新生2-3d的ICR(institute of cancer researcch,ICR)小鼠背部皮肤,通过机械分离和酶消化相结合的方法获取DMSCs,采用基础培养基加细胞因子的培养体系进行扩增；利用免疫组织化学方法鉴定不同代数DMSCs CD44、CD29和CD45的表达,RT-PCR鉴定Sca一1、CD29、CD90、CD34、Oct4、Sox2、c-Myc、Kif4基因的表达；摸索诱导DMSCs向脂肪、成骨、神经、心肌、汗腺细胞分化的方法,并采用细胞化学和RT-PCR法鉴定；将不同比例(20%、40%、60%、80%、100%)的成纤维细胞条件培养液作用于DMSCs,用MTT法检测作用后DMSCs的活性,进而寻求对DMSCs增殖有促进作用的条件培养液的合适浓度；取不同浓度(20nM、300nM、1μM、5μM、10μM)的Reversine作用于不同代数DMSCs,探讨Reversine对DMSCs增殖和分化能力的影响。结果显示,在以往培养条件基础上加以改进,成功获得DMSCs体外快速分离、稳定扩增体系；免疫组织化学鉴定表明DMSCs强表达CD44,弱表达CD29,不表达CD45;RT-PCR鉴定结果表明DMSCs表达Sca-1、CD29、CD90、CD34、c-Myc、Kif4,不稳定表达Oct4；成功诱导DMSCs向脂肪、成骨分化；20%、40%、80%浓度的成纤维细胞条件培养液对DMSCs的增殖有促进作用；Reversine对DMSCs的增殖无显著影响；但对DMSCs成脂分化有促进作用。