研究背景近年来,利用斑马鱼这种模式动物构建人类疾病模型已经成为研究热点。斑马鱼体外受精发育,易于观察,与人的同源性极高,胚胎和遗传学操作技术多且成熟。目前已有数千种利用斑马鱼构建的人类疾病模型,为研究疾病的发生和治疗提供了基础。斑马鱼属于脊椎动物,它的造血与其他脊椎动物一样,由原始造血和定向造血组成。斑马鱼的造血受到转录因子的调控,保证血细胞的正常增殖、分化和成熟。髓系增生异常综合征主要表现为髓系细胞的过度增殖及发育异常,成因复杂,有一部分患者转变为急性髓系白血病。研究者的“二次打击模型”认为,急性髓系白血病的生成需要两类突变基因的共同参与:第一类突变促使造血细胞增殖;第二类突变影响转录因子的功能并阻碍造血细胞的分化。c-MYB作为一个转录调控因子表达在造血干、祖细胞中,调控着细胞增殖、分化和决定命运。研究显示,c-myb缺陷的小鼠和斑马鱼在造血中都出现了一定程度的缺陷。Pu.1作为Ets转录家族一员,主要表达在血液细胞中,在造血中起着非常重要的转录调控作用。在Pu.1无效突变的小鼠中缺少巨噬细胞和B淋巴细胞,粒系细胞和T淋巴细胞发育受损。我们将已有的c-mybhyper转基因斑马鱼与pu.1G242D缺陷的突变体斑马鱼杂交到一起,获得了c-mybhyper;pu.1G242D的斑马鱼,通过对小鱼和成鱼进行表型分析,初步建立了c-myb过表达pu.1缺陷斑马鱼由髓系增生异常综合征向急性髓系白血病转变的疾病模型。1.目的本文的研究目的是在c-mybhyper转基因斑马鱼基础上构建类人类AML表型的斑马鱼疾病模型,从而1)提高c-mybhyper转基因斑马鱼中类AML表型产生的比例2)为c-mybhyper转基因斑马鱼中类MDS向类AML表型转化的分子机制提供参考。2.方法我们通过杂交的方法在c-nybhyper转基因斑马鱼中引入了pu.1点突变,造成了c-mybhyper;pu.1G242D/G242D的斑马鱼中高表达c-myb和低表达pu.1。然后我们用原位杂交的方法检测了胚胎期的c-mybhyper;pu.1G242D/G242D的髓系细胞特异标记基因的表达情况,并用细胞染色的方法检测了成鱼的外周血和肾脏的血细胞组成。3.结果我们发现,在胚胎期的c-mybhyper;pu.1G242D/(G242D斑马鱼中,髓系细胞大量增殖,大多数髓系细胞分化成中性粒细胞,巨噬细胞的数量极少;同时中性粒细胞的发育受到了影响。在成年c-mybhyer;pu.1G242D/G242D斑马鱼的外周血中出现了大量幼稚的髓系祖细胞,肾中富集了大量形态异常的中性粒细胞。4.结论在高表达c-myb和低表达pu.1的c-nybyper;pu.1G242D/G242D斑马鱼中,胚胎期出现不成熟的中性粒细胞的累积,巨噬细胞减少;成年期的血细胞中含有大量形态异常的髓系细胞,同时外周血中有髓系祖细胞出现,类似人类的AML疾病。