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目的:1、通过分别敲减结直肠癌耐药细胞（HCT-15/ADM）中脂筏上的结构蛋白Caveolin-1、Flotillin-1、Flotillin-2,观察敲减前后肿瘤细胞耐药性的变化,明确脂筏是否与肿瘤耐药性有关,评估改变脂筏结构作为潜在的逆转肿瘤耐药性靶点的意义,为逆转肿瘤耐药提供新的思路。2、观察结直肠癌耐药细胞HCT-15/ADM分别被敲低Caveolin-1、Flotillin-1和Flotillin-2蛋白,细胞主要信号传导通路MAPK、PI3K/Akt、Wnt、Notch中的关键分子 P38/p-P38、JNK/p-JNK、Akt/p-Akt、β-catenin、Notch1 的变化,筛选与肿瘤耐药性逆转有关的信号转导通路,评估其在肿瘤细胞耐药性逆转中的意义,初步探讨肿瘤耐药性逆转的信号转导机制。方法:1、HCT-15/ADM细胞株耐药性鉴定:已构建的HCT-1 5/ADM细胞株,阿霉素（Adriamycin;ADM）诱导恢复耐药。MTS法检测不同ADM浓度下的细胞活力,计算对ADM的半数抑制浓度（IC50）及耐药指数（RI）。2、构建敲减Caveolin-1稳转细胞株:设计出三对干扰引物片段及一对阴性对照shRNA引物片段,分别为shRNA1-3。构建shRNA-Cav1干扰质粒,与辅助质粒共转染293ft细胞,感染HCT-15/ADM细胞,用嘌呤霉素筛选稳转细胞株。qRT-PCR和Western Blotting法检测出敲减效果最明显的一株细胞。3、检测敲减Caveolin-1逆转效果:MTS法测定敲减Caveolin-1后HCT-15/ADM细胞株的细胞活力,计算其增殖抑制率及逆转倍数,判断HCT-15/ADM耐药性的变化情况。4、检测敲减 Caveolin-1、Flotillin-1 和 Flotillin-2 信号通路的表达:Western Blot 检测敲减 Caveolin-1、Flotillin-1 和 Flotillin-2 后 MAPK、P13K/Akt、Wnt、Notch 信号通路中 P38/p-P38、JNK/p-JNK、Akt/p-Akt、β-catenin、Notch1 的表达情况。（前期已构建敲减Flotillin-1、Flotillin-2稳转细胞株）。结果:1、HCT-15/ADM细胞株经ADM诱导恢复耐药后,耐药指数为:11.39,其耐药指数RI>5,符合中度耐药。2、构建shRNA-Cav1-3质粒,在转录和翻译水平验证转染效率,shRNA1-3 PCR 结果分别为 0.156±0.031、0.097±0.02、0.103±0.045,Western Blot 结果分别为 0.114±0.02,0.044±0.002、0.108±0.01,与对照组相比,敲减 Caveolin-1后3条序列均有效,且shRNA-2沉默效果最好。3、敲减 Caveolin-1 后,HCT-15/ADM 细胞 IC50 由 2.884±0.038μg/ml 降至1.341±0.049μg/ml,逆转倍数为 2.15,敲减 Caveolin-1 后 HCT-15/ADM 对阿霉素的敏感性增加。4、敲减 Caveolin-1 后,p-JNK 表达量为 0.618±0.057、Notchl 表达量为0.701±0.041,表达水平均下调;p-Akt表达量为1.127±0.013,表达水平上调,差异具有统计学意义;P38、p-P38、JNK、Akt及β-catenin表达水平均无统计学差异。5、敲减 Flotillin-1 和 Flotillin-2 后,p-JNK 表达量为 0.491±0.038、0.736±0.035,p-Akt 表达量为 0.82±0.036、0.869±0.051,表达水平均下调;p-P38表达量为 0.842±0.197、0.99±0.13,β-catenin 表达量为 0.976±0.093、1.058±0.044,Notch1 表达量为 0.884±0.054、0.971±0.083,表达水平均上调,差异具有统计学意义;P38、JNK、Akt表达水平均无统计学差异。结论:1、敲减Caveolin-1蛋白能够逆转结直肠癌耐药细胞HCT-15/ADM的耐药性。2、JNK信号通路中的p-JNK表达水平在敲减Caveolin-1、Flotillin-1和Flotillin-2后均下调,脂筏破坏后逆转耐药可能与MAPK信号通路中的JNK信号传导通路有关。3、敲减Caveolin-1后,Notch1表达水平下调,p-Akt表达水平上调;P38、p-P38、JNK、Akt及β-catenin表达水平均无统计学差异。敲减Flotillin-1和Flotillin-2后,p-P38、β-catenin及Notch1表达水平均上调;p-Akt表达水平下调,P38、JNK、Akt表达水平均无统计学差异。证明脂筏可影响不同信号通路的改变,为研究脂筏逆转结直肠癌耐药性的分子靶向治疗提供理论基础和方向指引。