泛素-蛋白酶体通路（Ubiquitin-proteasome Pathway，简称UP通路）是真核细胞内降解调节因子等短寿蛋白的重要途径，它参与了细胞内许多重要的生理生化过程（如DNA修复、细胞周期的运转、信号传递、抗原的提呈、蛋白的跨膜定位等）。近年来，其在细胞凋亡中的作用越来越受到重视，与之相关的调控机制也被广泛研究。应用特异性蛋白酶体抑制剂阻断UP通路，可诱导多种人肿瘤细胞的凋亡，为人类开发新的抗肿瘤药物提供了新的思路。另一方面，特异性阻断UP通路，对不同的细胞作用结果差异显著。尽管多数研究应用蛋白酶体抑制剂能诱导细胞凋亡，但另有一些研究发现，对某些细胞也有抑制凋亡的作用。 目的：1，观察蛋白酶体抑制剂Z-TL-CHO对人白血病细胞及正常骨髓的不同影响，并从细胞内Bc1-2蛋白表达变化的角度探索造成差异的可能机制。2，利用阻断UP通路诱导白血病细胞系凋亡的模型，进行凋亡相关蛋白质组学的初步研究。 方法：采用MTT法或台盼蓝拒染法测定Z-TL-CHO对细胞存活的影响；集落形成实验及免疫磁珠细胞分选后实验测定药物对原代骨髓造血干祖细胞水平的影响；流式细胞仪PI染色测定细胞周期；光镜或电镜下细胞形态学观察；DNA Ladder检测凋亡的发生；免疫印迹检测Bc1-2及Caspase-3的表达变化；比色法测定Caspase-3活性。蛋白质双向电泳，通过图象分析确立凋亡前后差异表达蛋白，以待进一步质谱鉴定。 结果：①蛋白酶体抑制剂Z-TL-CHO对多种人白血病细胞系呈剂量依赖性的诱发凋亡作用。凋亡过程伴随着胞内Bc1-2的酶解和Caspase-3的激活。对于Bc1-2同样高表达的白血病细胞系M-07e及KG-1a，其敏感性与Caspase-3酶原的激活程度及Bc1-2是否酶解有关。②正常人骨髓单个核细胞（MNCs）对Z-TL-CHO不敏感，不同白血病患者骨髓细胞对Z-TL-CHO的敏感性存在明显差异。免疫印迹显示对上述通路敏感的原代白血病细胞虽然Bc1-2蛋白表达量较高，但其在凋亡的过程中发生了特异位点的酶解；而对上述通路不敏感的细胞（包括正常人MNCs）Bc1-2蛋白低表达，或Bc1-2高表达但未能检测到其特异性酶解现象。③蛋白质组学的研究显示，Z-TL-CHO诱导M-07e凋亡过程中蛋白质组图谱发生变化，并呈现时间依赖关系。 摘要 上 实验结果提示：应用蛋白渺抑制剂阻断 UP通路可诱导大多数白血病细胞系和 部分原代白血病细胞的凋亡，而正常骨髓细胞对其不敏感。其敏感性可能与细胞中 即卜2蛋白是否发生特异位点的酶解具有相关性。利用蛋白酶体抑制剂阻断UP通路 能够快速、有效地诱导白血病细胞系凋亡的模型，初步建立了凋亡前后的蛋白质差 异表达谱，为进一步质谱鉴定及发现凋亡中新的分子作用机制打下酬。