基于金电极无标记冈田酸电化学免疫传感分析

来源 :哈尔滨工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaohan521325
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本文以聚碳酸酯滤膜(PC膜)为模板制备金三维纳米柱阵列电极(3DGNEs),通过循环伏安法电聚合对氨基苯甲酸(4-ABA)修饰常规金电极和3DGNEs,并以此为基底组装冈田酸(OA)电化学免疫传感器,实现OA浓度的检测。同时,在4-ABA修饰常规金电极和3DGNEs的基础上,引入蛋白A(SPA),组装一种检测限低的OA电化学免疫传感器,实现OA浓度的灵敏检测。基于电聚合4-ABA修饰金电极,构建BSA/anti-OA/4-ABA/Au免疫传感器。通过对电极表面羧基官能团的活化与OA抗体的氨基官能团反应固定OA抗体,并对羧基官能团的活化机理进行探讨,对羧基官能团的活化条件进行优化。在组装传感器过程中,优化4-ABA电聚合参数、优化OA抗体固定、牛血清蛋白封闭步骤的参数。采用EIS法对OA浓度进行检测时,优化免疫反应时间,其线性工作区间为6×10-9~1×10-7 g/m L,相对应的检测限是2.83×10-9 g/m L(S/N=3)。基于Au/4-ABA引入SPA构建BSA/anti-OA/SPA/4-ABA/Au免疫传感器。优化SPA固定、OA抗体固定、BSA封闭步骤的参数。在进行OA浓度检测时,优化抗原抗体免疫反应时间。采用EIS检测OA浓度,得到线性工作范围为5×10-10~1.2×10-8 g/m L,其相对应的检测限为3.21×10-10 g/m L(S/N=3)。采用SWV检测OA浓度,得到线性工作区间为2×10-10~1×10-8 g/m L,其相对应的检测限是7.62×10-10 g/m L(S/N=3)。采用模板法制备3DGNEs。采用场发射扫描电子显微镜(SEM)、能量色散X分析仪(EDX)对3DGNEs形貌合组成进行分析,采用电化学方法对3DGNEs电极的活性面积进行分析。基于电聚合4-ABA修饰3DGNEs,构建BSA/antiOA/4-ABA/3DGNEs免疫传感器。优化4-ABA电聚合、羧基活化、anti-OA固定、牛血清蛋白封闭等步骤参数。采用EIS对OA浓度检测,优化免疫反应时间,其线性工作区间为4.0×10-11~1.0×10-9 g/m L,对应检测限是2.34×10-11 g/m L(S/N=3)。基于3DGNEs/4-ABA引入SPA构建BSA/anti-OA/SPA/4-ABA/3DGNEs免疫传感器。优化SPA固定、OA抗体固定步骤参数。采用EIS检测OA浓度,得到线性工作范围为1×10-11~8×10-10 g/m L,对应的检测限是6.47×10-12 g/m L(S/N=3)。采用SWV检测OA浓度,得到线性工作范围为1×10-11~1×10-9 g/m L,对应的检测限是9.15×10-12 g/m L(S/N=3)。基于BSA/anti-OA/SPA/4-ABA/3DGNEs传感器对牡蛎样品中OA浓度进行检测,得到OA平均回收率为99.81%。
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