【摘 要】
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目的:克隆壳聚糖酶基因于大肠杆菌中实现高表达,制备壳寡糖.方法:以枯草芽孢杆菌总DNA为模板扩增壳聚糖酶基因(CSN),克隆至载体pET23a(+)上,转化菌株BL21 (DE3).重组子经0.5
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目的:克隆壳聚糖酶基因于大肠杆菌中实现高表达,制备壳寡糖.方法:以枯草芽孢杆菌总DNA为模板扩增壳聚糖酶基因(CSN),克隆至载体pET23a(+)上,转化菌株BL21 (DE3).重组子经0.5 mmol/L IPTC诱导后,SDS- PAGE和质谱检测与鉴定重组酶.酶纯化后水解壳聚糖,薄层色谱分析其水解产物.结果:质谱证明壳聚糖酶(31.5kDa)成功表达,表达量占菌体总蛋白的45％左右.纯化后重组酶浓度为900mg/L,纯度95％、回收率85％,酶活力为10 000 U/mg.壳聚糖降解产物为壳二糖至壳四糖.结论:原核表达载体pET23a(+)-CSN构建正确,壳聚糖酶表达量与活性高,适用于水解壳聚糖制备壳寡糖.
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