胰腺癌是一类严重危害人类健康的恶性肿瘤,恶性程度高,死亡率高,发病率呈逐年增高趋势,目前缺乏有效的早期诊断和治疗方法。胰腺癌发生机制复杂,目前尚不十分明确,寻找新的诊断治疗靶点是胰腺癌研究的重点。microRNAs (miRNAs)是一类长约20-24个核苷酸的非编码RNA,广泛参与了生命过程中的重要事件,在人类疾病中具有潜在的临床诊断和治疗意义。成熟miRNAs主要通过与靶基因碱基配对,影响靶mRNAs的稳定性及正常翻译,参与转录后表达调控。miRNAs在胰腺癌中表达失调,为了寻找新的可能成为诊断指标或靶向治疗靶点的miRNAs,进行了以下研究。根据文献中报道的胰腺癌中差异表达的miRNAs,软件预测其靶基因,结合参与胰腺癌发生发展的重要基因及染色体不稳定位点,筛选出一些新的可能与胰腺癌相关的miRNAs,选择了其中5个miRNAs进行细胞增殖实验(CCK-8实验),初步筛选出hsa-miR-615-5p能够抑制胰腺癌细胞系的生长。之后在较大样本量标本中使用实时定量PCR的方法和锁定原位杂交的方法,研究hsa-miR-615-5p在正常胰腺组织、癌前病变PanIN和胰腺癌中的表达情况,发现与正常胰腺导管上皮细胞相比hsa-miR-615-5p在胰腺癌细胞中表达下调。hsa-miR-615-5p位于12q13.13,存在于胚胎发育过程中重要转录因子HOX基因组群集区内。hsa-miR-615-5p可能具有影响胰腺癌生物学性状的功能,其异常表达可能与胰腺癌的发生、发展、浸润、转移有关。为了研究hsa-miR-615-5p的功能,在体外,利用hsa-miR-615-5p mimic有效转染胰腺癌细胞系MIA PaCa-2, PANC-1后,获得gain-of-function细胞模型,对表型的改变进行了分析；在体内利用慢病毒构建hsa-miR-615-5p过表达的稳转细胞系,制作动物移植瘤模型研究hsa-miR-615-5p在体内对胰腺癌的作用。结果显示,体外hsa-miR-615-5p表达恢复后,胰腺癌细胞系PANC-1和MIA PaCa-2增殖减缓；凋亡增加；S期细胞数明显降低；集落形成能力明显降低；侵袭能力降低；迁移能力减弱。体内,尾静脉注射肿瘤细胞后,miR-615组肝转移病灶数少于对照组；皮下移植瘤生长速度降低,肿瘤细胞增殖指数降低,凋亡增加。miRNAs通过直接调节靶基因发挥功能。为了寻找hsa-miR-615-5p的靶基因,我们首先利用miRecords数据库中12个预测软件的结果进行预测,结合胰腺癌发生发展过程中的关键基因,除去2个文献中报道验证的靶基因(KRT19、IGF2)后,选择NF к B2、AKT2作为候选靶基因。我们构建了含有靶基因结合位点的3’UTR的报告基因重组质粒,同时设立与hsa-miR-615-5p完全互补序列作为阳性对照。双荧光素酶报告基因实验结果提示,hsa-miR-615-5p直接调节了NF к B2、AKT2的表达。再通过Western blot验证了靶基因在蛋白水平的改变,从而初步说明NF к B2、 AKT2是hsa-miR-615-5p的靶基因。之后将结合位点进行突变,报告基因实验证实预测位点为hsa-miR-615-5p与靶基因的结合位点。对预测靶基因进行信号通路富集分析,结果显示57个信号通路具有靶基因富集现象。选择与肿瘤关系密切的MAPK信号通路上的关键蛋白进行western blot验证,证明hsa-miR-615-5p影响MAPK通路。为了研究hsa-miR-615-5p的临床应用价值,对hsa-miR-615-5p在胰腺癌中的表达与临床病理特征及预后进行了分析。hsa-miR-615-5p的表达和肿瘤组织学分级、肿瘤病理分期、临床TNM分期具有相关性,与其它临床病理参数无关。Kaplan-Meier分析Log-rank检验显示hsa-miR-615-5p的低表达与预后不良有关。综上所述,hsa-miR-615-5p抑制了胰腺癌细胞增殖,促进了细胞凋亡,并且调节了靶基因IGF2、NF к B2、AKT2的蛋白表达水平,提示hsa-miR-615-5p可能在胰腺癌的发生发展过程中起了重要的作用。hsa-miR-615-5p在胰腺癌中低表达,与胰腺癌分期相关,这些研究为胰腺癌的诊断和靶向治疗提供了初步的线索。