【摘 要】
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鸭坦布苏病毒病是由鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu virus,DTMUV）引起的,主要导致蛋鸭产蛋量下降,该病发病率高,在我国广东、江苏、安徽和北京等地都有报道,对水禽养殖业造成了严重的经济损失。2010年实验室分离得到鸭坦布苏病毒AH-F10株,由该毒株为样本进行PCR扩增获得M、E和M-E三段基因,大小分别为516bp、345bp和879bp。克隆至p MD-19-T,测序成功后分别将
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鸭坦布苏病毒病是由鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu virus,DTMUV）引起的,主要导致蛋鸭产蛋量下降,该病发病率高,在我国广东、江苏、安徽和北京等地都有报道,对水禽养殖业造成了严重的经济损失。2010年实验室分离得到鸭坦布苏病毒AH-F10株,由该毒株为样本进行PCR扩增获得M、E和M-E三段基因,大小分别为516bp、345bp和879bp。克隆至p MD-19-T,测序成功后分别将双酶切片段与表达载体p ET-32a相连接,转化至BL21后经诱导表达获得M、E和M-E融合蛋白,SDS-PAGE分析主要以包涵体形式表达,大小分别为40k Da、35k Da和55k Da。通过Western blot鉴定证明这三个蛋白具有良好的反应原性。为研究M、E和M-E蛋白的免疫原性,取32只健康非免疫的雏鸭,分为四组,每组8只,分别免疫M蛋白200μg/只、E蛋白200μg/只、M-E蛋白200μg/只及无菌PBS 0.2m L/只;于14日龄首免,两周后二次免疫,二免两周后对每组鸭用鸭坦布苏病毒10~4TCID50(TCID50=10-3.38/0.1m L)进行攻毒。通过淋巴细胞增殖试验对蛋白免疫效果进行评价,综合分析细胞因子检测、特异性抗体检测、剖检结果和病理学观察评价蛋白的保护效果。淋巴细胞增殖试验结果显示M、E和M-E组的SI值明显高于PBS组。IL-4、IFN-γ检测发现日龄42d到49d,细胞因子浓度值依次为M-E组、M组、E组、PBS组。特异性抗体水平检测结果发现日龄42d开始从高到低依次为M-E组、M组、E组、PBS组;M-E组与PBS组相比较在42d,49d和56d差异性显著（P<0.05）,M组与PBS组相比较在42d差异性显著（P<0.05）。剖解发现PBS组病变最严重,其中肌胃角质膜绿染。病理学观察发现PBS组组织病变比M组、E组和M-E组严重,脑、肝脏、肾脏和卵巢出现细胞坏死的情况。综上所述免疫M-E蛋白、M蛋白和E蛋白可对鸭坦布苏病毒产生良好的免疫保护效果,且以M-E蛋白最佳,为研制鸭坦布苏病毒的疫苗和疾病防治提供的参考。
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