论文部分内容阅读
玉屏风复合多糖(Yu Ping Feng Polysaccharides,YPF-P)是玉屏风散的有效部位群,含有黄芪多糖(Astragalus Polysaccharides,APS)、白术多糖和防风多糖等单味多糖,是该方剂临床药效的主要物质基础。YPF-P和APS都具有增强免疫力、抗应激、抗病毒等广泛的生物学活性,已在畜牧兽医领域得到广泛的应用。目前大部分传统中药多糖制剂存在着稳定性差、生物利用度低、易被降解及对细胞穿透力弱等缺点,影响了中药多糖药效的发挥。脂质体是一类具有缓慢释放、靶向给药、提高药物稳定性、降低药物不良反应等优点的药物载体,近年来已被广泛研究应用于传统中药制剂。本课题主要研究内容如下:(1)水提醇沉法提取YPF-P和APS,AB-8大孔树脂纯化,苯酚-硫酸法测定多糖含量;(2)薄层色谱(TLC)法和柱前衍生化HPLC法检测YPF-P和APS的单糖组成种类和物质的量之比;(3)逆相蒸发法制备YPF-P脂质体和APS脂质体,以正交设计优选制备条件,以超速离心法测定包封率;(4)透射电镜、纳米颗粒分析仪和傅里叶变换红外光谱(FTIR)法测定脂质体的形态、粒径、电位分布及化学结构;(5)体外释药试验考察脂质体药物释放情况;(6)噻唑蓝溴化四唑(MTT)法对脂质体作用48 h后的鸡脾脏淋巴细胞体外增殖能力测定;(7)在不同贮藏条件及模拟胃肠道环境下,测定脂质体的渗漏率考察其稳定性。结果表明:(1)提取得到YPF-P和APS的粗多糖含量均在60%以上,经AB-8大孔树脂纯化后的精多糖含量均在90%以上;(2)YPF-P由D-果糖、D-甘露糖、D-核糖、鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、阿拉伯糖8种单糖组成,物质的量之比为6.31:3.13:1:5.38:2.21:126.18:41.13:66.99;APS由D-果糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、阿拉伯糖5种单糖组成,物质的量之比为8.39:1:263.41:11.26:8.32;(3)逆相蒸发法制备YPF-P脂质体和APS脂质体最佳工艺均为膜材比8:1,脂药比4:1,超声时间90 s,YPF-P脂质体包封率88.68%,APS脂质体包封率92.87%;(4)YPF-P脂质体平均粒径231.4 nm,多分散指数(PDI)0.317,Zeta电位-30.6 m V;APS脂质体平均粒径232.1 nm,多分散指数(PDI)0.242,Zeta电位-32.8 m V;两者形态均为椭圆形或圆球形,化学结构均无形成新的化学键;(5)YPF-P脂质体和APS脂质体24h后累积释放率分别为73.45%和62.67%,均具有良好的缓释作用;(6)YPF-P脂质体和APS脂质体均能单独作用或协同伴刀豆球蛋白(Con A)显著刺激鸡脾脏淋巴细胞增殖,YPF-P脂质体比APS脂质体作用效果好;且多糖脂质体作用效果显著高于未包裹多糖;(7)YPF-P脂质体在冷藏(3～5℃)和室温下贮存60 d后渗漏率分别为4.65%和42.61%,APS脂质体为4.43%和32.28%;两者均在p H 6.8～8.0 PBS溶液、人工肠液及蒸馏水中稳定性较好,在偏酸性环境和人工胃液中稳定性有待提高。该方法制备的多糖脂质体包封率均在80%以上,具有良好缓释性与稳定性,均适宜在(3～5℃)冷藏条件下贮存,在中性条件下和人工肠液中较稳定,在酸性条件下和人工胃液中稳定性有待提高。本课题在兽药领域开展了中药多糖脂质体的创新性研发,对提高多糖制剂生物利用度、稳定性以及治疗效果有指导意义。