【摘 要】
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目的：探讨氯沙坦对H2O2诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及其与PI3K/AKT信号通路活化的关系。方法：原代培养SD新生大鼠心肌细胞，以H2O2建立心肌细胞损伤模型。实验分组：（A）正常对照组；（B）H2O2损伤组：培养基中加入H2O2终浓度为100μmol/L；（C）氯沙坦低剂量组：培养基中先加入终浓度为1μmol/L氯沙坦孵育30min，再加入相同的H2O2损伤；（D）氯沙坦中剂量组：先加入终
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目的：探讨氯沙坦对H2O2诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及其与PI3K/AKT信号通路活化的关系。
方法：原代培养SD新生大鼠心肌细胞，以H2O2建立心肌细胞损伤模型。实验分组：（A）正常对照组；（B）H2O2损伤组：培养基中加入H2O2终浓度为100μmol/L；（C）氯沙坦低剂量组：培养基中先加入终浓度为1μmol/L氯沙坦孵育30min，再加入相同的H2O2损伤；（D）氯沙坦中剂量组：先加入终浓度为3μmol/L氯沙坦孵育30min，再加入相同的H2O2损伤；（E）氯沙坦高剂量组：先加入终浓度为10μmol/L氯沙坦孵育30min，再加入相同的H2O2损伤；（F）LY294002干预组：先加入终浓度为10μmol/L氯沙坦和50μmol/L的LY294002孵育30min，再加入相同的H2O2损伤。不同药物处理后，观察各组的心肌细胞形态变化、MTT细胞存活率、测定培养上清乳酸脱氢酶（LDH）活性、丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性、细胞浆内caspase3/7活性以及Western Blotting检测p-Akt（Ser473）蛋白的表达。
结果：
1．细胞形态：H2O2损伤组和LY294002干预组心肌细胞均停止自发搏动，细胞间连接减少，细胞伪足收缩，细胞胞体变圆、肿胀甚至悬浮。氯沙坦各剂量组均能够逆转H2O2引起的这些改变。
2．MTT细胞存活率：与正常组相比，H2O2损伤组和LY294002干预组的心肌细胞存活率显著降低，与损伤组相比，LY294002干预组细胞存活率无差别，氯沙坦各剂量组均能显著提高细胞存活率，但各剂量组间并没有差别。LY294002干预组存活率明显低于氯沙坦高剂量组。
3．LDH活性：与H2O2损伤组相比，氯沙坦各剂量组均能够显著降低LDH活性。H2O2损伤组和LY294002干预组这两组间并无差别。氯沙坦终浓度为10μmol/L时，LDH活性最低，明显低于LY294002干预组，且与正常组无差别。
4． MDA含量：与正常组相比，H2O2损伤组和LY294002干预组MDA含量明显升高。与H2O2损伤组相比，氯沙坦各剂量组显著降低MDA含量，但与LY294002干预组无差别。与LY294002干预组相比，氯沙坦高剂量组MDA含量明显有差异。MDA含量随氯沙坦的浓度上升而有下降趋势，但各剂量组间无差别。
5． SOD活性：与损伤组相比，氯沙坦呈剂量依赖性提高SOD活性。损伤组和LY294002干预组相比并无差别。氯沙坦各剂量组间SOD活性无差别。氯沙坦高剂量组与正常组无差别，且与LY294002干预组比明显提高SOD活性。
6． Caspase3/7活性：与正常组相比，H2O2损伤组和LY294002干预组的Caspase3/7活性均明显高升高，但这两组间并无差别。与H2O2损伤组比，Caspase3/7活性明显与氯沙坦浓度有依赖关系，其活性随浓度的减少而增加。LY294002干预组Caspase3/7活性明显高于氯沙坦高剂量组。
7．蛋白P-Akt表达：氯沙坦处理后，各剂量组的p-Akt蛋白表达明显增强，且有剂量依赖关系。表明氯沙坦可以通过Akt抑制H2O2诱导的细胞损伤。
结论：
1．H2O2对心肌细胞产生损伤作用后，心肌细胞培养上清LDH活性、MDA含量和Caspase3/7活性上升，SOD减少，细胞生存率显著下降。
2．氯沙坦剂量依赖性减少损伤心肌细胞培养上清的LDH活性、MDA含量和Caspase3/7活性，提高SOD活性，从而提高细胞生存率。
3．PI3K/Akt信号通路介导了氯沙坦对H2O2所致心肌细胞损伤的保护作用。
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