北极狐毛色艳丽、毛皮浓密,具有极好保温性能,在毛皮交易中占有重要地位,而其毛色对毛皮质量具有巨大影响,所以关于毛色形成机制的研究成为近几年的一个热点。但是关于北极狐的毛色形成机制的研究又报道很少。本人通过对北极狐胚胎期转录组分析发现,Wnt3a基因对黑色素的形成具有重要作用,而涉及到北极狐的研究则从来没有发现。因此本文对北极狐Wnt3a基因在黑色素形成过程中的作用和机制进行了研究,以期为进一步挖掘北极狐的毛色形成机制进行理论补充和铺垫。本研究利用基因超表达技术,构建了北极狐Wnt3a基因的超表达载体,将其转染至A375细胞后,利用实时荧光定量PCR的方法对Wnt3a、MITF、TYR、TYRP1、PMEL基因的表达量进行了检测,同时利用Western blot技术对TYRP1、PMEL蛋白的表达量进行了检测。此外有报道发现,Wnt3a对黑色素形成的调控是通过MITF基因实现的,因此,本研究又对MITF与其下游基因的关联性进行了研究。构建了北极狐MITF基因的超表达载体,转染至A375细胞后,对其下游基因TYR、TYRP1、PMEL的表达量进行测定。同时,又根据课题组前期构建的包含北极狐TYR、TYRP1基因启动子片段的萤火虫荧光素酶报告基因表达载体,利用双荧光素酶检测技术,对它们与MITF基因的结合关系进行了研究。结果发现:1.北极狐Wnt3a基因超表达后,可以通过促进MITF、TYR、TYRP1、PMEL基因表达的方式,来调控黑色素的表达。2.北极狐MITF基因超表达后,可以对下游基因TYR、TYRP1、PMEL的表达起到促进作用。3.北极狐TYR基因启动子区存在MITF结合位点,其位置位于启动子区-90/-89区域,它可以正向调控北极狐TYR基因转录。4.北极狐TYRP1基因启动子区存在MITF结合位点,其位置位于启动子区-747/-746区域,它可以正向调控北极狐TYRP1基因转录。