论文部分内容阅读
目的:探索补中益气方对人喉鳞状细胞癌( laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)的增殖情况变化及AKT1、NF-κB表达水平的影响,基于AKT1NF-κB信号通路部分诠释补中益气汤抑制LSCC细胞增殖和侵袭的作用机制。
方法:(1)制备实验用血清:选取SD大鼠(Sprague-Dawley大鼠)20只,均为雄性,体重在300±10g,SPF环境中生长,随机选取10只大鼠分别纳入空白血清对照组及补中益气方实验血清组,每天灌胃一次,每次以10mL/kg剂量灌胃。空白血清对照组给予生理盐水灌胃,补中益气方实验血清组给予经方补中益气方灌胃,连续灌胃5天后腹主动脉取血,-80℃冰箱分组保存。(2)补中益气方含药血清对人喉鳞状细胞癌(FADU、SCC-4)增殖情况的研究:将喉鳞状细胞癌(FADU、SCC-4)复苏,培养传代3代后,于细胞对数生长期时进行实验干预,实验共分五组:①对照组:100%普通培养基;②空白血清组:90%普通培养基+10%空白血清;③5%含药血清组:95%普通培养基+5%含药血清;④10%含药血清组:90%普通培养基+10%含药血清;⑤20%含药血清组:80%普通培养基+20%含药血清。分别加入不同浓度的补中益气方含药血清及空白血清,收集上清液及细胞。采用CCK8法检测人喉鳞状细胞癌(FADU、SCC-4)增殖情况;(3)补中益气方含药血清对人喉鳞状细胞癌作用机制的研究:采用WesternBlot法检测各组细胞AKT1、P-AKT1、NF-κB蛋白的表达。对所得实验数据进行整理,采用SPSS22.0统计学软件,统计并分析数据。
结果:(1)补中益气方含药血清各浓度组均可延缓人喉鳞状细胞癌(FADU、SCC-4)的增殖,在干预72小时时细胞活性降到最低,而其中补中益气汤干预喉鳞癌细胞的最佳浓度为20%。各浓度含药血清组与对照组的细胞增殖活性率相比存在差异,差异有统计学意义(p<0.05)。(2)与对照组相比,各浓度补中益气方含药血清组中NF-κB蛋白表达量均有所下降,存在明显差异(p<0.05);其中5%含药血清组的表达显著降低,其次为20%含药血清组,不同浓度含药血清实验组之间的表达存在差异(p<0.05)。(3)20%含药血清组在P-AKT1、AKT1蛋白的表达上明显下降,显著低于对照组,之间差异有统计学意义(p<0.05)。其他浓度含药血清实验组与对照组相比差异不显著。
结论:补中益气方含药血清可抑制人喉鳞状细胞癌(FADU、SCC-4)的增殖, AKT1、NF-κB可能是其发生发展的关键调控靶点,其机制可能是通过下调AKT1NF-κB蛋白的表达,从而达到抑制喉鳞状细胞癌的增殖。
方法:(1)制备实验用血清:选取SD大鼠(Sprague-Dawley大鼠)20只,均为雄性,体重在300±10g,SPF环境中生长,随机选取10只大鼠分别纳入空白血清对照组及补中益气方实验血清组,每天灌胃一次,每次以10mL/kg剂量灌胃。空白血清对照组给予生理盐水灌胃,补中益气方实验血清组给予经方补中益气方灌胃,连续灌胃5天后腹主动脉取血,-80℃冰箱分组保存。(2)补中益气方含药血清对人喉鳞状细胞癌(FADU、SCC-4)增殖情况的研究:将喉鳞状细胞癌(FADU、SCC-4)复苏,培养传代3代后,于细胞对数生长期时进行实验干预,实验共分五组:①对照组:100%普通培养基;②空白血清组:90%普通培养基+10%空白血清;③5%含药血清组:95%普通培养基+5%含药血清;④10%含药血清组:90%普通培养基+10%含药血清;⑤20%含药血清组:80%普通培养基+20%含药血清。分别加入不同浓度的补中益气方含药血清及空白血清,收集上清液及细胞。采用CCK8法检测人喉鳞状细胞癌(FADU、SCC-4)增殖情况;(3)补中益气方含药血清对人喉鳞状细胞癌作用机制的研究:采用WesternBlot法检测各组细胞AKT1、P-AKT1、NF-κB蛋白的表达。对所得实验数据进行整理,采用SPSS22.0统计学软件,统计并分析数据。
结果:(1)补中益气方含药血清各浓度组均可延缓人喉鳞状细胞癌(FADU、SCC-4)的增殖,在干预72小时时细胞活性降到最低,而其中补中益气汤干预喉鳞癌细胞的最佳浓度为20%。各浓度含药血清组与对照组的细胞增殖活性率相比存在差异,差异有统计学意义(p<0.05)。(2)与对照组相比,各浓度补中益气方含药血清组中NF-κB蛋白表达量均有所下降,存在明显差异(p<0.05);其中5%含药血清组的表达显著降低,其次为20%含药血清组,不同浓度含药血清实验组之间的表达存在差异(p<0.05)。(3)20%含药血清组在P-AKT1、AKT1蛋白的表达上明显下降,显著低于对照组,之间差异有统计学意义(p<0.05)。其他浓度含药血清实验组与对照组相比差异不显著。
结论:补中益气方含药血清可抑制人喉鳞状细胞癌(FADU、SCC-4)的增殖, AKT1、NF-κB可能是其发生发展的关键调控靶点,其机制可能是通过下调AKT1NF-κB蛋白的表达,从而达到抑制喉鳞状细胞癌的增殖。