猪流感(Swine Influenza,SI)是由猪流感病毒(Swine Influenza Virus,SIV)引起的猪的一种急性、高度传染性的呼吸道传染病。目前,我国猪群中流行的SIV主要有H1N1、H1N2和H3N2三种亚型,不同亚型的SIV又可以分为不同的分支,并且不同亚型和不同分支之间的SIV均可以发生重组。由于猪呼吸道受体分布的特性,使得猪既可以感染禽流感病毒,又可以感染人流感病毒,进而在猪体内产生新的重组病毒,因此猪被称为流感病毒的“混合器”,在流感病毒“禽-猪-人”的传播链中发挥着重要作用。为了了解华南地区猪群中SIV的流行和感染情况以及SIV的变异、重组和遗传演化情况,我们对华南地区猪群展开了SIV的病原学和血清学调查。我们从2016年~2017年华南地区采集的236份猪肺脏病料组织和143份猪鼻拭子样品中共分离鉴定到3株SIV,分别命名为A/Swine/Guangxi/NK/2016、A/Swine/Guangdong/ZSBS/2017和A/Swine/Fujian/NP/2017。全基因组测序结果显示,三株SIV均为H1N1亚型,三个毒株之间HA蛋白的氨基酸同源性在96.6%~97.9%之间。遗传演化分析结果显示,三株SIV均属于欧亚类禽分支,并且均与pdm09 H1N1发生了重组,均为重组毒株。其中A/swine/Guangxi/NK/2016的HA和NA基因属于欧亚类禽分支,PB2、PB1、PA、NP和M基因属于pdm09分支,而NS基因属于经典猪流感分支,是一种三源重组毒株;A/swine/Guangdong/ZSBS/2017的HA、NA、NP和NS基因属于欧亚类禽分支,而PB2、PB1、PA和M基因属于pdm09分支;A/swine/Fujian/NP/2017的HA、NA、M和NS基因属于欧亚类禽分支,而PB2、PB1、PA和NP属于pdm09分支。说明猪群中pdm09分支和欧亚类禽分支之间的重组现象已经非常普遍。另外,对三株SIV的HA蛋白分子特征分析结果显示,A/Swine/Guangxi/NK/2016 HA蛋白上第23位的糖基化位点发生了缺失。2016年7月~2017年6月间从华南地区猪群中采集3265份血清样品,通过HI实验对血清样品中SIV的抗体进行测定,结果表明H1N1(EA分支和pdm09分支)和H3N2亚型SIV在我国猪群中共同流行。EA H1N1、pdm09 H1N1和H3N2 SIV的血清阳性率分别为27.53%、20.98%和34.85%,其中H3N2亚型SIV血清阳性率最高(p<0.01)。另外,H9N2亚型流感病毒的血清阳性率为0.64%,但没有检测到H5N1和H7N9的特异性抗体,说明猪群中存在有H9N2亚型流感病毒感染猪的情况。我们还发现猪群中不同亚型和不同分支SIV之间混合感染的情况非常普遍,其中EA H1N1和pdm09之间以及EA H1N1和H3N2之间混合感染率较高,分别为11.3%和10.01%。在血清抗体滴度方面,EA H1N1、pdm09和H3N2亚型SIV HI抗体滴度最高均可达到1:1280,而H9N2亚型HI抗体滴度最高仅为1:160,说明H9N2 AIV虽然可以感染猪,但对猪这一宿主还并不适应。此外,我们还分析了SIV在猪群中的流行具有一定的季节性,其在冬季(11月、12月和1月份)的流行最为严重。鉴于猪群中SIV的混合感染以及SIV之间的重组情况,需要加强对猪群中SIV的监测,以了解和掌握猪群中SIV的遗传变异和重组情况,鉴定猪群中SIV的主要流行毒株,为SIV的防控提供科学依据。另外,我们还研究了甘草酸二铵(DG)对流感病毒的抗病毒作用及其作用机制,结果显示,DG可以抑制流感病毒的复制,并且其抗流感病毒作用具有剂量依赖性,250μg/mL的DG即可明显抑制流感病毒的复制。随后,我们进一步研究了DG对流感病毒复制周期的影响,结果表明,DG对流感病毒复制的早期阶段(吸附和进入宿主细胞)没有影响,而主要是抑制流感病毒复制的后期阶段(复制过程)。另外,我们还比较了DG处理组和未处理组之间几种细胞因子mRNA的表达水平,结果发现,二者IFN-γ和TNF-α的mRNA表达水平均具有明显的差异(p<0.01)。其中DG处理组中IFN-γmRNA的表达水平要显著高于未处理组,其表达水平升高约1.7倍;而DG处理组中TNF-α的mRNA表达水平显著低于未处理组,其表达水平降低约2.4倍。根据以上结果,我们推测DG通过其免疫调节功能发挥其抗病毒作用,一方面DG可以诱导宿主细胞产生IFN-γ,以抵抗流感病毒的感染;另一方面,DG可以降低炎症因子TNF-α的表达水平,以减轻TNF-α诱导的炎症反应,从而减轻宿主的免疫损伤。通过对DG抗流感病毒作用及其作用机制的初步研究,显示DG可作为潜在的抗流感病毒药物,为抗流感病毒药物的筛选奠定基础。