汉麻木质素降解菌筛选及培养条件优化

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汉麻作为一种近年来发展迅速的特种生物资源,可广泛应用于纺织、造纸、食品、医药、建筑、交通运输、国防军工等领域。在造纸工业中,因α-纤维素含量高而受到多个国家造纸业的重视。在传统的造纸工业中,废水废气排放严重污染环境。因此生物法制浆被越来越广泛地研究与应用,生物制浆以微生物分解为主,配合各种物理破解与机械破解交叉组合的复合工艺,可以做到零排放、无污染、无臭味、无悬浮物、节省能耗、节省原材料、降低生产成本。通过查阅大量文献,本研究计划通过对微生物降解木质素及纤维素能力的测定对比,采集土样以及真菌子实体筛选出适合用于生物预处理造纸原材料中的菌株,优化培养条件,从而达到利用汉麻进行生物制浆预处理目的。从采集的土样与子实体样品中的分离得到51株真菌,进行酶活测定以及愈创木酚平板筛选后得到两株真菌,初步鉴定为毛栓菌和木蹄层孔菌。进行生长速率测定以及酶活比较后确定供试菌种为毛栓菌。为进一步提高毛栓菌产木质素过氧化物酶活性,本文分别从发酵条件以及添加外源诱导物两方面进行优化。对发酵条件的优化,本文选取了五个影响因素,进行单因素实验,从中选出四个显著因素,分别为发酵时间,发酵温度,装液量以及接菌量,进行中心组合实验设计(BBD)。优化后,将发酵时间6.75d,发酵温度30℃,装液量64 ml,接菌量12块为最优培养条件,测定木质素过氧化物酶活性为689.938 U/L。测定优化前后的木质素过氧化物酶活性,优化发酵条件之前毛栓菌对汉麻秸秆发酵产木质素过氧化物酶活力为503.29 U/L,优化发酵条件之后其产酶活力为720.09 U/L,优化后木质素过氧化物酶活力提高了43.08%。添加外源诱导物提高毛栓菌的产酶活性部分,本文分别向培养基中添加不同浓度的藜芦醇溶液,苯甲醇溶液,吐温80溶液以及茉莉酸甲酯,测定结果表明,添加藜芦醇对提高酶活影响在四种外源诱导物中最大。在此基础上进行正交试验设计。优化后结果为每100 ml产酶培养基中,添加40 m M藜芦醇80μL,添加10 ml/L苯甲醇70μL,添加10 ml/L吐温80,30μL,添加Me JA1.6μL。进行三组平行实验,用藜芦醇法测定木质素过氧化物酶活性,得到酶活平均值为650.2049 U/L,较优化前提高了45.07%。
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