九种中药成分的免疫增强活性及其作用机理研究

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从6种常用传统中草药中提取制备了9种免疫增强活性成分,应用免疫学技术,以从中筛选作为新型免疫增强剂的成分或配方,并探索其作用机理。采用体内实验与体外实验相结合的观察方式,探讨了他们各自对小鼠特异性免疫因素、非特异性免疫因素、免疫细胞和免疫分子的作用效应,并通过动物实验比较了它们各自在临床应用时的增强免疫效果,最终筛选出了一部分中药活性成分,作为低毒、高效的新型免疫增强剂配方。 实验1,为本研究提取和制备了9种中药活性成分,分别为:当归多糖(77.28%)、黄芪多糖(82.48%)、板蓝根多糖(82.94%)、淫羊藿多糖(66.38%)、蜂胶多糖(51.41%)、蜂胶黄酮(46.92%)、淫羊藿黄酮(38.37%)、黄芪黄酮(1.39%)、黄芪皂甙(72.88%)。 实验2,采用腹腔注射的给药方式,测定了9种中药成分对正常小鼠脾脏和外周血淋巴细胞增殖反应的影响。结果表明,9种药物的促进ConA和LPS诱导小鼠外周血和脾脏淋巴细胞增殖的活性,可以排序为淫羊藿多糖>黄芪多糖,蜂胶黄酮>人参皂甙,当归多糖>蜂胶多糖,板蓝根多糖>淫羊藿黄酮>黄芪皂甙,同时根据各药物的作用特点筛选出了体内实验的合适剂量,分别为多糖类20mg/Kg·d,黄酮和皂甙类5mg/Kg·d。 实验3,观察了9种中药成分对体外培养的小鼠淋巴细胞增殖的影响。按照刺激的强弱可以排序为淫羊藿多糖、黄芪多糖、人参皂甙、蜂胶黄酮>淫羊藿黄酮>当归多糖>黄芪皂甙,与体内实验相似,揭示体内体外的实验结果有较强的相关性;而且根据各药物体外作用的特点选择了合适的体外实验用剂量,多糖类为20ug/ml,黄酮和皂甙类为5ug/ml。 实验4,应用半定量RT-PCR方法,测定了9种中药成分对小鼠脾脏T细胞IL-2mRNA水平的影响。按照T细胞内IL-2mRNA水平的高低,可将9种成分的作用效应排序为:黄芪多糖>淫羊藿多糖>蜂胶黄酮>当归多糖>黄芪皂甙>蜂胶多糖>板兰根多糖>人参皂甙>淫羊藿黄酮。 实验5,将9种中药成分按体内实验确定的剂量给小鼠腹腔注射后,分别测定其腹腔巨噬细胞功能和脾脏NK细胞杀伤活性的变化。按腹腔巨噬细胞的活性强弱排序为人参皂甙>黄芪多糖>蜂胶黄酮>淫羊藿黄酮>当归多糖>淫羊藿多糖>蜂胶多糖,按NKC杀伤率大小排序为人参皂甙>蜂胶黄酮>黄芪多糖>淫羊藿黄酮>淫羊藿多糖>蜂胶多糖>当归多糖,其余成分作用不显著。 实验6,用绵羊红细胞定量溶血测定法代替空斑溶血实验,检测了9种中药成分对小鼠脾脏抗体分泌细胞数量的影响。结果显示,按照光吸收值大小可排列为人参皂戒>蜂胶黄酮>黄茂多糖>淫羊察黄酮>淫羊落多糖>黄艺皂么,其余成分则低于对照。 实验7,将合适剂量下的9种中药成分和(或)LPS加入到体外培养的小鼠脾脏淋巴细胞体系中,共培养5天后测定培养物上清里的 IgG水平。结果发现按照0D490值的大小可以排列为:人参皂武>蜂胶黄酮、黄艺多糖>淫羊茶多糖>当归多糖>淫羊霍黄酮,其余成分低于对照。 实验8,9种中药成分在兔瘟组织灭活疫苗免疫家兔前连续3天分别皮下注射,用微量血凝抑制实验(HI)进行体液免疫水平测定,观察各成分对兔瘟组织灭活疫苗的免疫增强效果。结果发现,在最大杭体效价上比较各成分的增强作用,则可排序为:人参皂忒>淫羊茶多糖>蜂胶黄酮>黄艺多糖>当归多糖>淫单薄黄酮>其他成分。 根据这些实验的结果我们发现,各活性成分的作用机理与作用特点不尽相同,我们可脚它们的免疫活性强弱,将黄民多糖、人参皂么、淫羊茗多糖、蜂胶黄酮作为新型免疫增强剂的首选对象,将当归多糖、淫羊渡黄酮、黄艺皂洲为备选。
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