目的:（1）探索神经生长因子（Nerve growth factor,NGF）通过下丘脑-垂体-睾丸（Hypothalamus-pituitary-testis,HPT）轴升高性激素的调控靶点及其作用机制。（2）研究NGF对快速老化小鼠（SAMP8）迟发性性腺机能减退症（Late-onset hypogonadism,LOH）的治疗作用,以及对非梗阻性无精症小鼠（Nonobstructive azoospermia,NOA）精子再生的促进作用,为NGF应用于低促性腺激素性性腺机能减退症和神经相关生殖缺陷提供理论依据。方法:（1）采用阳离子脂质体载药体系,通过单次鼻腔滴注给药NGF（25μg/kg、50μg/kg、100μg/kg）,酶联免疫吸附实验（ELISA）和放射免疫分析（RIA）方法检测血清促黄体生成素（Luteinizing hormone,LH）和睾酮浓度变化。（2）通过对比脑室注射、静脉注射NGF对性激素调控作用的不同,推测NGF调控性激素的作用靶器官;采用ELISA和荧光标记蛋白的方法,检测鼻腔滴注NGF的入脑分布,以及根据NGF与促性腺激素释放激素（Gonadotropinreleasing hormone,Gn RH）拮抗剂的联用实验进一步明确NGF作用的靶器官;运用荧光定量PCR（RT-PCR）和ELISA法确定NGF对下丘脑Gn RH表达和分泌的调控作用;采用免疫荧光技术（IF）检测NGF受体Trk A和p75与Gn RH的共定位表达,NGF与Trk A抑制剂或Kisspeptin抑制剂联用实验确定NGF调控性激素的作用靶点。（3）采用Gn RH神经元体外模型GT1-7细胞,检测NGF（10 ng/m L、50 ng/m L、100 ng/m L）给药处理对Gn RH表达和分泌的作用;Western blots法检测PKC和MAPK信号通路蛋白的表达变化;ELISA法检测Trk A抑制剂、PKC抑制剂、MEK1/2抑制剂对NGF调控Gn RH分泌的影响;启动子荧光素酶报告系统检测NGF对Gnrh1启动子活性的调控作用。（4）以10月龄的SAMP8小鼠为LOH模型,检测鼻腔滴注脂质体NGF（12.5μg/kg、25μg/kg、50μg/kg、100μg/kg,每周2次,连续12周）对小鼠血清性激素、性行为、致孕率、精子质量、睾丸病理形态学和精原细胞分化相关标记蛋白表达的作用,老龄化相关的空间探索能力、四肢抓力、运动平衡性、脂质代谢的改变,综合评价NGF对LOH模型小鼠的治疗药效。（5）利用白消安诱导的NOA模型小鼠,检测鼻腔滴注脂质体NGF（25μg/kg、50μg/kg、100μg/kg,每周2次,连续6周）对血清性激素、精子质量和睾丸病理形态学的影响,验证NGF对NOA模型小鼠的治疗药效。结果:（1）阳离子脂质体载药体系显著提高鼻腔滴注NGF对性激素的升高作用。（2）NGF通过HPT轴调控血清性激素的作用靶器官是下丘脑;鼻腔滴注NGF可分布于小鼠的下丘脑;下丘脑Gn RH神经元胞体表达Trk A受体;NGF-Trk A通路直接调控Gn RH的表达和分泌;NGF对Kisspeptin的表达和分泌无显著影响。（3）NGF-Trk A通过上调GT1-7细胞PKCα、p-ERK1/2、p-CREB的表达,激活PKC和MAPK信号通路调控Gn RH的分泌,NGF通过促进CREB磷酸化提高Gnrh1启动子活性从而调控Gnrh1 m RNA的转录。（4）鼻腔滴注脂质体NGF显著上调LOH模型小鼠的血清性激素水平,增强性行为能力,提高致孕率和精子质量,促进睾丸萎缩的恢复和精原细胞的分化,明显改善小鼠老龄化相关的空间探索能力、四肢抓力、运动平衡性,使LOH小鼠的生殖功能和老龄化状态恢复至Gn RH给药组水平,与正常对照的SAMR1小鼠相当。（5）鼻腔滴注脂质体NGF显著提高NOA模型小鼠的血清性激素水平,促进损伤睾丸的恢复和精子的再生,提高精子质量。结论:（1）NGF-Trk A可通过直接调控下丘脑Gn RH神经元,通过PKC和MAPK信号通路调控Gn RH的分泌,进而调控HPT轴功能升高血清性激素水平。（2）NGF有效改善低促性腺激素性LOH小鼠的HPT轴的分泌功能和性行为能力,促进精原细胞发育,提高精子质量和生殖功能,改善老龄化相关运动能力,对LOH小鼠具有明显的治疗药效。（3）NGF有效促进非梗阻性无精症小鼠睾丸的部分恢复和精子的再生。