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目的:近来研究提示,阿尔茨海默病患者脑内存在细胞周期蛋白的异常表达,其发病与异常的细胞周期相关,Tob蛋白作为细胞周期负性调控因子很可能在其发病中发挥着重要作用。本实验中,我们采用快速老化型小鼠SAMP8作为阿尔茨海默病(AD)的动物模型,以SAMR1为对照,首先应用蛋白印迹方法检测不同月龄SAMP8/R1小鼠脑区Tob蛋白的表达情况;若存在相关性,则进一步通过基因手段干预Tob蛋白的表达,以探讨Tob蛋白z在阿尔茨海默病相关样行为发生中的作用及其潜在的分子信号通路。方法:(1)应用Western Blotting检测SAMP8和对照SAMR1小鼠脑区Tob蛋白水平的增龄性变化;(2)CA1脑区注射Tob1相关病毒后,检测小鼠脑区Tob1和Tob2蛋白的表达情况;(3)CA1脑区微注射Tob1腺相关病毒后,小鼠学习记忆行为的变化;(4)CA1脑区微注射AAV-Tob2-shRNA病毒后,检测脑区Tob1和Tob2蛋白水平的改变;(5)CA1脑区微注射AAV-Tob2-shRNA病毒后,SAMP8和SAMR1小鼠学习记忆行为的变化。结果:(1)同月龄SAMR1小鼠为对照,SAMP8小鼠脑内蛋白Tob1和Tob2在前额叶皮层(PFC)和海马(HIP)内的表达水平并未出现明显的增龄性变化(p>0.05)。(2)海马亚区CA1和DG中,9月龄SAMP8小鼠蛋白Tob1和Tob2水平均较其他组显著性升高(p<0.05),而9月龄SAMR1小鼠DG亚区内Tob2的表达虽出现升高趋势,但仍低于SAMP8小鼠Tob2的水平;然而亚区CA3中,各组小鼠间蛋白Tob1和Tob2的表达未见明显变化(p>0.05)。(3)3月龄SAMP8小鼠CA1脑区微注射病毒AAV-GFP、AAV-Tob1-3*flag-GFP干预Tob1表达后,HIP脑区Tob1蛋白表达显著性增多(p<0.05),而HIP脑区Tob2及PFC脑区Tob1和Tob2的表达无明显变化(p>0.05)。(4)3月龄SAMP8小鼠CA1脑区微注射病毒AAV-GFP、AAV-Tob1-3*flag-GFP后,与GFP对照组相比,Tob1过表达组在NOR-1h测试中表现为新物体识别能力的受损(p<0.05),且24h测试中受损程度更为严重。(5)7月龄小鼠CA1脑区微注射病毒AAV-GFP和/或AAV-Tob1-shRNA-GFP干预Tob1表达后,SAMR1-GFP组和SAMR1-7month组相比,其脑区内蛋白Tob1和Tob2的水平均未见明显变化(p>0.05);而SAMP8-Tob1-shRNA组HIP脑区Tob1蛋白表达出现明显的下调(p<0.05),即使SAMP8-Tob1-shRNA组蛋白Tob2在HIP脑区的表达出现下降趋势(p=0.079>0.05),但差异无显著统计学意义,且PFC脑区蛋白Tob1和Tob2的水平未见明显变化(p>0.05)。(6)7月龄小鼠CA1脑区微注射病毒AAV-GFP、AAV-Tob1-shRNA-GFP后,行为学结果提示:与R1-GFP对照组相比,SAMP8-Tob1-shRNA和SAMP8-GFP两组在NOR-1h和24h测试中均表现为新物体识别能力受损(p<0.05),SAMP8-GFP组受损较为严重;且24h测试中,SAMP8-Tob1-shRNA和SAMP8-GFP两组新物体识别指数间的差异存在统计学意义(p<0.05)。(7)3月龄小鼠CA1脑区微注射病毒AAV-GFP、AAV-Tob2-shRNA-GFP干预Tob2表达后,其HIP脑区的确出现了Tob2蛋白的表达减少(p<0.05),但HIP脑区蛋白Tob1及PFC脑区的蛋白Tob1和Tob2的水平均未出现明显变化(p>0.05)。(8)3月龄小鼠CA1脑区微注射病毒AAV-GFP、AAV-Tob2-shRNA-GFP后,无论新颖物体识别实验和Morris水迷宫任务,各组小鼠在其1h和24h行为学测试中均未见明显的行为学改变(p>0.05)。结论:1)小鼠脑区PFC和HIP内蛋白Tob1和Tob2的表达未出现明显增龄性变化;随后对海马HIP各亚区进一步分析知,SAMP8小鼠亚区CA1和DG中蛋白Tob1和Tob2随月龄增长表现出不同程度的表达增多;2)基因手段对CA1脑区Tob1蛋白表达进行干预,并未影响PFC和HIP脑区Tob2蛋白及PFC脑区Tob1蛋白的表达;3)Tob1蛋白的确与阿尔茨海默病的发病相关,负性调控着SAMP8小鼠的学习记忆能力;4)基因手段敲低CA1脑区的Tob2蛋白,HIP脑区的确出现了Tob2蛋白的表达减少,且存在统计学意义,但HIP脑区蛋白Tob1及PFC脑区的蛋白Tob1和Tob2蛋白表达未出现明显变化;5)基因手段敲低CA1脑区Tob2蛋白表达,并未引起SAMP8小鼠行为学的明显改变,现有数据表明Tob2蛋白水平的改变对SAMP8小鼠的学习记忆能力无显著性影响。