伪狂犬病(pseudorabies，PR)是1902年由Aujeszky在匈牙利发现的，100年来世界上有40多个国家报道发生该病，据统计伪狂犬病对畜牧业造成了巨大经济损失，仅次于口蹄疫及猪瘟。研究病毒与宿主的相互关系，明确细胞的重要分子调控病毒感染的细胞自身修复或凋亡机制，不仅有助于深入理解病毒的致病机理，开发新的抗病毒制剂，还为探索细胞内分子事件打开了窗口，而且对治疗病毒性疾病意义深远。本研究选择参与PRV侵入细胞和病毒释放的两个囊膜糖蛋白gC和gH作为免疫原制备抗体，分析gC蛋白和gH蛋白在真核细胞中的表达，初步探讨PRV的复制，为下一步阐述PRV与感染细胞相互作用的研究奠定基础。　　 1)构建伪狂犬病病毒gC膜外区部分基因的重组质粒，原核表达并纯化重组蛋白，纯化蛋白为抗原制备抗-PRV gCN813抗体，并分析获得抗体的特异性。据Gen Bank上发表的伪狂犬病病毒Bartha(PRV Ba)株gC基因的序列(NC EU719641)设计并合成了1对引物，PRV Ba株基因组为模板，PCR扩增出PRV gC膜外区部分基因片段;PCR产物亚克隆到原核表达载体pET-28a(+)，转化E.coli BL21(DE3)，IPTG诱导，获得大小为35kD的重组蛋白His-gCN813;纯化的重组蛋白His-gCN813免疫新西兰大白兔，间接ELISA测定抗体的效价达1∶1000000，Western-blot鉴定所制备的抗-PRV gCN813抗体的特异性。　　 2)构建PRVgH部分基因片段的三个重组质粒，原核表达并纯化重组蛋白，纯化的蛋白为抗原制备抗PRV gH抗体，并分析获得抗体的特异性。据Gen Bank上已发表的PRV Ba株gH基因的序列(M61196)设计并合成3对引物，PRV Ba株基因组为模板，PCR扩增PRV gH三段基因片段gHN660、gHM687和gHC516;这三段基因分别亚克隆到原核表达载体pET-28a(+)，转化E.coli BL21(DE3)，IPTG诱导，获得大小分别为29kD、30kD和24kD的重组蛋白His-gHN660、His-gHM687和His-gHC516;纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔，间接ELISA测定抗体的效价分别为1∶1000000、1∶100000和1∶10000，Western-blot鉴定所制备的抗-PRV gHN660、抗-PRV gHM687和抗-PRV gHC516抗体的特异性。　　 3)利用获得的抗体分析真核细胞中gC蛋白和gH蛋白的表达，探讨PRV的复制情况。构建的真核质粒p3xFLAG-gC转染Vero细胞，Western-blot和IFA试验证明FLAG-gC蛋白主在转染细胞浆中高效表达;PRV感染Vero细胞，Western-blot试验发现随PRV复制，感染细胞中gC蛋白和gH蛋白呈现逐渐增加，证明获得的抗体能够说明感染细胞中PRV的复制，为下一步阐述PRV与感染细胞相互作用的研究奠定基础。