目的:研究淫羊藿苷(Icariin,ICA)对自然衰老大鼠皮层和海马神经元自噬水平的调节作用及作用机制,以期为淫羊藿苷治疗应用于中枢神经退行性疾病的防治提供实验基础。方法:将24只16月龄SD大鼠随机分为衰老模型组(20M)、ICA低剂量组(ICAL)和ICA高剂量组(ICAH),每组各8只;衰老模型组给予正常维持饲料,ICAL、ICAH给予含有ICA的药物混合饲料,给药剂量分别为2 mg/kg和6 mg/kg。另取8只6月龄SD大鼠作为青年对照组(6M)。持续给药4个月后,乌拉坦麻醉后腹主动脉取血处死,分取皮层和海马部位。HE染色观察大鼠皮层和海马组织细胞形态学变化;Nissl染色观察大鼠皮层和海马中神经元尼氏体变化情况;Western Blot检测皮层和海马组织中LC3B、p62、Atg5、Beclin1、p-ULK1(ser757)、p-m TOR、p-AMPK蛋白表达;免疫荧光检测LC3与神经元共定位。结果:1)HE染色结果显示,与6M相比,20M大鼠皮层组织中神经元大量变性,突出表现为核固缩、胞浆减少,淫羊藿苷可有效改善衰老伴随的神经元变性。20M大鼠海马椎体神经细胞层数明显减少,神经细胞排列松散,细胞核深染、固缩,淫羊藿苷干预后,椎体神经细胞层数呈剂量依赖性增加,且细胞形态得到明显改善。2)Nissl染色结果显示,20M皮层和海马组织中,尼氏小体着色变浅,淫羊藿苷可显著增加尼氏小体着色。3)Western Blot结果显示,与6M比较,20M皮层和海马组织中自噬相关蛋白p62表达量显著增加,LC3B、Atg5(皮层组织中略有下降但无统计学意义)和Beclin1蛋白含量明显降低,调控自噬的通路蛋白p-AMPK表达量明显下降(皮层组织中略有下降但无差异),p-m TOR和p-ULK1(ser 757)表达量明显上升。低、高剂量ICA能够促进衰老大鼠皮层和海马组织中自噬相关蛋白LC3B、Atg5(皮层组织中略有上升但无统计学意义)和Beclin1的表达上调,下调p62蛋白的表达,并能促进自噬相关信号通路中p-AMPK蛋白的表达,抑制p-m TOR和p-ULK1(ser 757)蛋白的表达。4)免疫荧光结果提示,皮层和海马组织中LC3主要在神经元中表达,与6M比较,20M皮层和海马组织中神经元表达的LC3荧光强度明显减弱,而给予ICA干预后,神经元中LC3的荧光强度明显增加。结论:ICA可有效改善衰老大鼠皮层及海马神经元形态,其主要机制为通过活化衰老大鼠皮层和海马组织中AMPK,抑制m TOR的活化,从而减弱p-m TOR对ULK1的757位点丝氨酸的磷酸化,激活神经元中的自噬水平,改善神经细胞的功能。