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目的:通过观察补肾填精益髓法对脑出血大鼠的神经功能评分、出血灶周脑组织病理形态、内源性神经干细胞的增殖分化以及调控Wnt3a表达的影响,探讨补肾填精益髓法治疗脑出血的作用机制,为其临床应用提供可靠的实验学依据。
方法:将所有SD大鼠随机选取126只分为,空白组6只、假手术组24只、模型组24只、补肾填精益髓法低剂量(肾低)组24只、补肾填精益髓法中剂量(肾中)组24只、补肾填精益髓法高剂量(肾高)组24只,再把造模成功的SD大鼠,根据随机数字表法分作4个时间点,分别是3d、7d、14d、28d,分为4个亚组,每个亚组6只。空白组正常饲养28d进行取材,其余组在3d、7d、14d、28d的不同时间点进行取材。(1)观察大鼠神经功能评分的变化;(2)采用尼氏染色法观察出血灶周脑组织尼氏小体的病理形态变化,对含尼氏小体阳性细胞进行计数;(3)采用免疫组化法观察出血灶周脑组织中的Nestin和DCX的阳性细胞数;(4)采用Western-Blot法检测出血灶周脑组织中的Wnt-3a蛋白的表达。
结果:(1)与假手术组比较,模型组各时间点功能缺损明显改善(P<0.01)。与模型组大鼠比较,肾低组、肾中组和肾高组各时间点功能缺损明显改善(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。(2)与假手术组比较,模型组含尼氏小体阳性细胞计数明显减少(P<0.01)。与模型组比较,肾低组、肾中组和肾高组含尼氏染色小体阳性细胞数明显增加(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。(3)与假手术组比较,模型组Nestin阳性表达显著(P<0.01);与模型组比较,肾低组、肾中组和肾高组Nestin阳性表达明显增加(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。(4)与假手术组比较,模型组DCX阳性表达显著(P<0.01);与模型组比较,肾低组、肾中组和肾高组DCX阳性表达明显增加(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。(5)与假手术组比较,模型组Wnt-3a蛋白的相对量增强(P<0.01);与模型组比较,肾低组、肾中组和肾高组Wnt-3a蛋白的相对量明显增加(P<0.01,P<0.01,P<0.01)。
结论:(1)补肾填精益髓法对大鼠脑出血后缺损的神经功能症状改善明显。(2)补肾填精益髓法减缓大鼠出血灶周脑组织中的尼氏小体的丢失,改善出血灶周脑组织的神经元的功能。(3)补肾填精益髓法能促进大鼠出血灶周脑组织中的Nestin和DCX的表达,进一步证明其促进出血灶周脑组织NSCs增殖分化的作用。(4)补肾填精益髓法促进大鼠出血灶周脑组织NSCs增殖分化的作用机制,有可能是通过上调大鼠出血灶周脑组织细胞Wnt-3a表达,激活经典Wnt/β-catenin信号通路,启动靶基因转录,促进脑组织NSCs增殖分化。
方法:将所有SD大鼠随机选取126只分为,空白组6只、假手术组24只、模型组24只、补肾填精益髓法低剂量(肾低)组24只、补肾填精益髓法中剂量(肾中)组24只、补肾填精益髓法高剂量(肾高)组24只,再把造模成功的SD大鼠,根据随机数字表法分作4个时间点,分别是3d、7d、14d、28d,分为4个亚组,每个亚组6只。空白组正常饲养28d进行取材,其余组在3d、7d、14d、28d的不同时间点进行取材。(1)观察大鼠神经功能评分的变化;(2)采用尼氏染色法观察出血灶周脑组织尼氏小体的病理形态变化,对含尼氏小体阳性细胞进行计数;(3)采用免疫组化法观察出血灶周脑组织中的Nestin和DCX的阳性细胞数;(4)采用Western-Blot法检测出血灶周脑组织中的Wnt-3a蛋白的表达。
结果:(1)与假手术组比较,模型组各时间点功能缺损明显改善(P<0.01)。与模型组大鼠比较,肾低组、肾中组和肾高组各时间点功能缺损明显改善(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。(2)与假手术组比较,模型组含尼氏小体阳性细胞计数明显减少(P<0.01)。与模型组比较,肾低组、肾中组和肾高组含尼氏染色小体阳性细胞数明显增加(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。(3)与假手术组比较,模型组Nestin阳性表达显著(P<0.01);与模型组比较,肾低组、肾中组和肾高组Nestin阳性表达明显增加(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。(4)与假手术组比较,模型组DCX阳性表达显著(P<0.01);与模型组比较,肾低组、肾中组和肾高组DCX阳性表达明显增加(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。(5)与假手术组比较,模型组Wnt-3a蛋白的相对量增强(P<0.01);与模型组比较,肾低组、肾中组和肾高组Wnt-3a蛋白的相对量明显增加(P<0.01,P<0.01,P<0.01)。
结论:(1)补肾填精益髓法对大鼠脑出血后缺损的神经功能症状改善明显。(2)补肾填精益髓法减缓大鼠出血灶周脑组织中的尼氏小体的丢失,改善出血灶周脑组织的神经元的功能。(3)补肾填精益髓法能促进大鼠出血灶周脑组织中的Nestin和DCX的表达,进一步证明其促进出血灶周脑组织NSCs增殖分化的作用。(4)补肾填精益髓法促进大鼠出血灶周脑组织NSCs增殖分化的作用机制,有可能是通过上调大鼠出血灶周脑组织细胞Wnt-3a表达,激活经典Wnt/β-catenin信号通路,启动靶基因转录,促进脑组织NSCs增殖分化。