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目的:建立胰腺癌PANC-1细胞皮下移植瘤模型,探讨沉默KLK7基因对接种胰腺癌PANC-1细胞SCID小鼠成瘤能力的影响,探索KLK7小分子抑制剂的药物毒性及其对SCID小鼠PANC-1细胞移植瘤的药效作用。方法:(1)培养胰腺癌PANC-1(原始细胞)、S4(利用基因敲除技术使PANC-1细胞KLK7基因沉默的细胞)及NC(使用空载慢病毒转染的PANC-1细胞)三种细胞,分别建立三种SCID小鼠皮下移植瘤模型。(2)按KLK7小分子抑制剂给药浓度将SCID小鼠分为五组:对照组(DMSO)、6.25m M组、12.5m M组、25m M组、50m M组,构建毒性试验小鼠模型;连续给药21天,观察各组小鼠的中毒症状及死亡情况等,监测小鼠体重变化,实验结束后处死小鼠并对其重要脏器(心、肝、脾、肺、肾)进行HE染色,观察各组小鼠心、肝、脾、肺、肾组织病理学改变。(3)建立PANC-1、S4、NC三组皮下移植瘤模型后,观察并记录各组小鼠的一般情况(如精神、饮食、活动等)以及成瘤率,定期监测小鼠体重及瘤体体积的变化情况。接种2个月后处死小鼠,测量肿瘤重量,并对重要脏器(心、肝、脾、肺、肾)进行HE染色,观察重要脏器的转移情况。(4)建立PANC-1小鼠皮下移植瘤模型后,将其分为三组(对照组、10m M组及50m M组),分别给予对应浓度的KLK7小分子抑制剂,对照组给予相同体积的DMSO,观察并记录各组小鼠的一般情况(如精神、饮食、活动等)以及成瘤率,定期监测小鼠体重及瘤体体积的变化情况。实验进程结束后处死小鼠,测量瘤重,并对重要脏器(心、肝、脾、肺、肾)进行HE染色,观察重要脏器的转移情况。结果:(1)成功建立了胰腺癌PANC-1细胞小鼠皮下移植瘤模型,接种第11天左右,可于接种部位开始触及到大小不一的硬结,整体成瘤率为81.25%。(2)毒性实验:通过实验观察发现,整个实验进程中,对照组及6.25m M组未出现小鼠死亡,12.5m M、25m M及50m M组中雌性小鼠分别于第11、10、20天各死亡一只;体重监测发现,与对照组相比,实验组雌性小鼠体重波动较大,均有不同程度的下降;重要脏器病理切片显示实验组肾脏中肾单位有部分坏死,脾脏中可见细胞密度变稀,白髓变少,呈浓度依赖性,以50m M最为明显,说明KLK7小分子抑制剂对SCID小鼠肾脏及脾脏有一定的毒性作用,而对心脏、肝脏及肺未见明显毒性作用。(3)成功建立PANC-1、NC、S4三种胰腺癌小鼠皮下移植瘤模型,结果发现整个实验进程中基因敲低组小鼠皮下移植瘤生长缓慢,瘤体体积明显小于空白对照组,阴性对照组也较空白对照组瘤体体积小。空白对照组成瘤率为100%,肿瘤质量为(0.57±0.20)g,阴性对照组成瘤率为85.71%,肿瘤质量为(0.3±0.20)g,基因敲低组成瘤率为64.29%,肿瘤质量为(0.15±0.15)g,由此可见,基因敲低组及阴性对照组肿瘤质量明显小于空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);HE染色各组心、肝、脾、肺、肾均未见明显转移征象。(4)有效性试验可发现,50m M组整个实验进程中小鼠皮下移植瘤生长最为缓慢,瘤体体积明显小于对照组,10m M组小鼠皮下移植瘤生长速度较50m M组快,但亦小于对照组。对照组成瘤率为78.57%,肿瘤质量为(0.031±0.030)g,10m M组成瘤率为64.29%,肿瘤质量为(0.017±0.017)g,50m M组成瘤率为31.43%,肿瘤质量为(0.004±0.008)g,由此可见,50m M组肿瘤质量明显小于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);HE染色各组心、肝、脾、肺、肾均未见明显转移征象。结论:本课题在动物水平上进一步证实了沉默KLK7对PANC-1皮下移植瘤的成瘤率及增殖能力具有抑制作用,同时验证了前期合成的KLK7小分子抑制剂对PANC-1细胞皮下移植瘤的生物恶性行为具有抑制作用,为靶向治疗胰腺癌的药物开发提供了依据。