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研究背景和目的白色念珠菌是医院人群真菌感染的主要致病菌。这一机会病原体可以无症状的定植在健康人体的许多部位。由于抗菌药物的广泛应用,导致了具有耐药性的白色念珠菌的出现。白色念珠菌耐药的一个主要因素是其能够适应不同的环境,并粘附在其表面以生物膜的形式生长。生物膜的出现使得临床治疗白色念珠菌感染变得更加困难。生物膜内的白色念珠菌对各种抗真菌药物如氟康唑、制霉菌素、两性霉素B和氯己定具有高度的抵抗性。因此,我们迫切的需要寻找一种新的抗真菌方法。蓝光在临床上广泛用来治疗痤疮。近年来,蓝光,特别是波长在405nm-470nm之间,被用来杀灭铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌等各种病原菌。本实验中,我们主要讨论蓝光对体外游离和生物膜内白色念珠菌及小鼠创面上白色念珠菌的杀灭作用。研究方法1.450-470nm可见光杀灭游离状态白色念珠菌的实验研究:采用平板涂板法检测0、12、60、120、240J/cm2能量密度的蓝光对白色念珠菌的杀灭作用;流式细胞术检测240J/cm2能量密度的蓝光照射后0.5h、1h、2h后白色念珠菌的死亡率。2.450-470nm可见光杀灭生物膜内白色念珠菌的实验研究:构建白色念珠菌生物膜体外模型;将成熟生物膜模型分为空白对照组和蓝光干预组两组,蓝光干预组采用240J/cm2能量密度的蓝光照射,然后两组采用Live/Dead染料染色后在激光扫描共焦显微镜下观察并比较蓝光的杀菌效果。3.450-470nm可见光杀灭小鼠皮肤创面上的白色念珠菌的实验研究:24只裸鼠随机均分为蓝光干预组、阳性对照组、阴性对照组三组,全部制作裸鼠背部1cmx1cm皮肤全层缺损创伤模型;于蓝光干预组、阳性对照组创面上接种20ul浓度为1x109 CFU/ml的白色念珠菌菌液;蓝光干预组采用240J/cm2能量密度的蓝光分别于第1、2、3天进行照射;采用平板涂板法检测蓝光杀菌效果;对各组小鼠创面愈合情况、小鼠体重变化进行监测比较,对小鼠皮肤行苏木精-伊红染色并在显微镜下观察炎性细胞的浸润情况。结果1.60J/cm2、120J/cm2、240J/cm2能量密度的蓝光可以有效杀灭体外游离白色念珠菌,P均<0.05;白色念珠菌经过240J/cm2能量密度的蓝光照射后0.5h、1h、2h后与空白对照组三个时相点的死亡率相比,差异显著,p均<0.05。2.白色念珠菌在96微孔板中培养3d即可形成成熟的生物膜;240J/cm2能量密度的蓝光可以杀灭生物膜全层内的白色念珠菌。3.240J/cm2能量密度的蓝光可以有效杀灭小鼠创面上的白色念珠菌;与蓝光干预组相比,阳性对照组小鼠体重损失更大;蓝光可以促进小鼠感染创面加速愈合;阳性对照组小鼠创面炎症细胞数量要高于蓝光干预组和阴性对照组。(P均<0.05)结论450-470nm波长的可见光可以有效杀灭体外游离和生物膜内的白色念珠菌,并且能够抑制在体的白色念珠菌感染。