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背景:先天性心脏病是最常见的出生缺陷疾病,其发病机制尚未阐明。miR-29c是我们采用芯片技术,筛选得到的一条高表达于室间隔缺损胚胎心肌组织中的mi RNA。前期研究已发现:miR-29c表达变化显著影响P19细胞增殖;生物信息学分析和荧光素酶报告实验证实Akt3是其靶基因,涉及细胞增殖相关信号通路;室缺心肌组织中PI3K、Akt3表达明显受抑,提示miR-29c致胚胎心脏畸形的机制可能与其对PI3K-Akt3信号通路的调控相关。本研究拟:在细胞水平观察mi R-29c过表达对心肌细胞增殖凋亡及分化的影响;进一步以PI3K-Akt3信号通路为切入点,深入研究miR-29c致胚胎心脏发育畸形的分子机制。miR-29c致胚胎心脏畸形及其机制研究尚未见文献报道,本研究有源头创新性,可为先心病的早期防治提供新的线索及潜在干预靶标。方法:1.P19细胞经miR-29c mimic转染后,利用CCK8实验、流式细胞术、Hoechst染色实验、实时定量荧光PCR以及蛋白印记实验检测miR-29c过表达对P19细胞的增殖、周期以及凋亡的影响。2.miR-29c mimic转染处理P19细胞后,生物信息学分析结合荧光素酶报告实验和蛋白印记实验明确miR-29c的靶基因。3.P19细胞经si-Akt3转染后,利用CCK8实验、流式细胞术、Hoechst染色实验、实时定量荧光PCR以及蛋白印记实验检测Akt3沉默对P19细胞的增殖、周期以及凋亡的影响。4.P19细胞经miR-29c mimic和si-Akt3处理后,二甲亚砜（DMSO）诱导P19细胞分化,实时定量荧光PCR检测心肌特异性标志基因肌球蛋白重链（α-myosin heavy chain,αMHC）,转录因子GATA4,心肌增强因子2c（Myocyte enhancer factor 2c,Mef2c）和心肌肌钙蛋白T（cardiac troponin T,cTNT）表达情况,明确miR-29c过表达和si-Akt3沉默对P19细胞分化的影响。结果:1.P19细胞经miR-29c mimic转染后,细胞的增殖能力被抑制,细胞周期阻滞于G0/G1期,Bax表达水平明显增高,细胞凋亡率增高。2.荧光素酶报告实验及蛋白印记实验证实了Akt3为miR-29c的靶基因;3.Si-Akt3处理后的P19细胞系细胞的增殖能力被抑制,细胞周期阻滞于G0/G1期,Bax的mRNA表达水平明显增高,而Bcl-2的蛋白表达水平明显降低,细胞凋亡率增高。4.P19细胞经miR-29c mimic和si-Akt3处理后,分化形成的胚胎样小体形态更均匀而稳定,后期形成更多的跳动心肌细胞,心肌标志基因αMHC,Mef2c,GATA4和cTNT表达水平明显增高。结论:1.miR-29c过表达能够抑制P19细胞的增殖、促进其凋亡,阻滞细胞周期,并且促进向心肌细胞的分化;2.Akt3是miR-29c的一个下游靶基因,miR-29c过表达通过抑制Akt3靶基因的表达,影响其对P19细胞的生物学作用。