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目的:通过探讨妇科分泌物来源的阴道加德纳菌（GV）生物膜的形成能力、抗生素耐药情况、唾液酸酶A基因携带情况以及患者相关临床资料的分析,研究阴道加德纳菌与细菌性阴道病（BV）的相关性,协助临床医生认识细菌性阴道病的可能发病机制,指导临床合理应用抗生素,保障妇女身体健康。方法:1、收集2018年1月-2018年12月于大连医科大学附属第一医院妇科门诊及住院患者培养出的阴道加德纳菌分离株25株,作为实验组,在哥伦比亚血平板三区划线,于37℃5%CO2孵箱培养48-72h,利用飞行时间质谱系统Clin-ToF-Ⅱ进行识别,进一步采用API Strep链球菌鉴定条确认。购自美国菌种保存中心的ATCC14018和ATCC 14019作为阳性对照组。2、采用微量板半定量法对25株阴道加德纳菌临床分离株的生物膜形成能力进行检测。用无菌棉签蘸取血平板上阴道加德纳菌纯菌落于BHI培养基中配成0.5麦氏浊度,37℃、5%CO2孵育箱中培养24h,用提前配置好的BHI培养基1:100稀释加入96孔培养板（200ul/孔）,37℃厌氧静置培养44-48h,弃菌液,PBS清洗3次,甲醇固定15 min,室温干燥,加入1%结晶紫染色8 min,水洗至无色,室温干燥,用无水乙醇脱色5 min,将脱色液转移到新的96孔板中,用酶标仪570nm波长检测各菌株的OD值。各菌株测得的OD570的平均值加3倍标准差值与ATCC14018进行对比,评价临床加德纳菌菌株的生物膜形成能力。3、提取阴道加德纳菌基因组DNA,采用定性PCR结合定量PCR对阴道加德纳菌的唾液酸酶A基因进行检测。将定性PCR的反应产物在2%琼脂糖凝胶上进行电泳。对定量PCR的解链温度、熔解曲线以及扩增曲线进行分析判断,以ATCC14019标准菌株作为阳性对照。4、采用琼脂稀释法对25株阴道加德纳菌临床分离株进行药敏试验,试管分装定量灭菌蒸馏水或缓冲液作为稀释液的空白液,稀释液配制方法:采用1:2,1:4和1:8连续稀释法配制抗菌药物中间液。甲硝唑以DMSO助溶,利福布汀用无水乙醇助溶,克林霉素用无菌水溶解,所有药物用无菌水稀释。受试药物的测定范围是:甲硝唑:0.0019-32μg/ml,利福布汀:0.0019-32μg/ml,克林霉素:0.0019-32μg/ml。以菌落悬浮法挑取培养基上的新鲜菌落制备0.5麦氏浊度的接种菌液,菌液浓度为108 CFU/mL,调整好的菌液在制备后的30分钟内完成药敏平板点种,药敏平板上的接种菌量为105 CFU/点。药物板和无药对照板放入厌氧环境37℃孵育42-48小时。5、收集来自就诊于大连医科大学附属第一医院妇科门诊及住院2018年1月2018年12月同时进行BV涂片诊断和一般菌培养的女性患者阴道分泌物标本共105例,年龄19岁80岁,平均年龄（33.7±8.21）岁。蘸取血平板上的单个纯菌落利用质谱仪进行鉴定,将所有标本分成阴道加德纳菌组和乳酸杆菌组调查两组间分布与年龄、PH值、阴道清洁度以及与BV的相关性。两组样本与年龄、PH值的关系采用两独立样本的t检验,P﹤0.05认为两者存在统计学差异,采用四格表的χ2检验对比分析阴道加德纳菌组与乳酸杆菌组阴道清洁度的差异,P﹤0.05,认为两者阴道清洁度分级具有统计学差异,采用四格表的χ2检验对比分析阴道加德纳菌组与乳酸杆菌组之间BV患病情况（阴性或阳性）,P﹤0.05,认为两组之间有统计学差异。将所有阴道加德纳菌临床分离株分成生物膜阴性和阳性两组,比较两组间年龄、PH值、阴道清洁度以及与BV的差异。采用的统计学方法与以上方法相同。结果:1、在25株阴道加德纳菌临床分离株中,测得11株生物膜形成阳性,阳性率为44%。2、结合定性PCR和定量PCR两种检测方法对25株阴道加德纳菌临床分离株进行检测,24株携带唾液酸酶A基因,两者结果相一致,所有阴道加德纳菌菌株中唾液酸酶A基因阳性率高达96%。3、对3种抗菌药物的试验结果显示,阴道加德纳菌对甲硝唑的敏感范围MICS?16ug/ml,50%抑菌率MIC50=32ug/ml,90%抑菌率MIC90=32ug/ml。阴道加德纳菌对利福布汀的敏感范围为MICS=0.0075-0.25ug/ml,50%抑菌率MIC50=0.031ug/ml,90%抑菌率MIC90=0.25ug/ml。阴道加德纳菌对克林霉素的敏感范围为MICS=0.031-32ug/ml,50%抑菌率MIC50=0.25ug/ml,90%抑菌率MIC90=32ug/ml。4、阴道加德纳菌组患者年龄为32.12±8.54岁,乳酸杆菌组患者年龄为34.36±9.67岁,采用两组独立样本的t检验对比分析发现P?0.05,两组年龄不具有统计学差异。阴道加德纳菌组PH值为5.35±0.10,乳酸杆菌组PH值为5.20±0.32,P﹤0.05,两组PH值具有统计学差异,乳酸杆菌组阴道PH值较阴道加德纳菌组PH值小。采用四格表的χ2检验对比分析阴道加德纳菌组与乳酸杆菌组阴道清洁度的差异,P﹤0.05,两者阴道清洁度分级具有统计学差异,阴道加德纳菌组阴道清洁度绝大多数为Ⅲ级,乳酸杆菌组阴道清洁度ⅡⅢ级不等。采用四格表的χ2检验对比分析阴道加德纳菌组与乳酸杆菌组之间BV患病情况,χ2=5.123,P﹤0.05,两组之间有统计学差异。比较阴道加德纳菌生物膜阴性、阳性两组间的年龄、阴道PH值、阴道清洁度、BV分布情况,各组间P值均大于0.05,发现均没有统计学差异。本研究采用Pearson相关分析评价妇科分泌物中培养出阴道加德纳菌和患BV的关系。这两个变量间存在线性关系,根据Shapiro-Wilk检验两变量符合正态分布（P?0.05）,并且不存在异常值。妇科分泌物培养出阴道加德纳菌与患者患有BV间存在高度正相关关系,r=0.969,P﹤0.001。结论:1、大连地区流行分布的阴道加德纳菌临床分离株生物膜形成能力,与其他地区流行分布的阴道加德纳菌成膜能力相接近。2、大连地区流行分布的阴道加德纳菌临床分离株唾液酸酶A基因携带率较其他报道的要高,高达96%。3、大连地区流行的阴道加德纳菌分离株对利福布汀保持高度敏感,对克林霉素已有不同程度的耐药,对甲硝唑已高度耐药。4、阴道加德纳菌组和乳酸杆菌组两组间比较,发现年龄无差异,PH值与清洁度有差异,两组BV分布有统计学差异;阴道加德纳菌与患者患有BV间存在高度正相关关系。阴道加德纳菌生物膜的有无与上述几项指标无相关。