FIGNL1在肝细胞肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞增殖的作用机制

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【目的】
  探究FIGNL1在肝细胞肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞Huh7增殖的作用机制。
  【方法】
  1.从癌症基因组图谱TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库中下载肝细胞癌RNA测序数据和临床数据,通过perl及R语言进行数据处理及可视化,比较肝细胞癌组织与正常组织中FIGNL1表达情况,应用Logistic回归分析FIGNL1表达水平与患者性别、年龄、临床分期、病理分级的相关性。利用Kaplan-Meier生存分析FIGNL1高低表达组对生存预后的影响并绘制生存曲线,构建ROC曲线评估FIGNL1对肝细胞癌预后的诊断效能,采用多变量COX比例风险模型来分析性别、年龄、临床分期、病理分级、FIGNL1与预后的关系。
  2.体外培养2种肝癌细胞株(Hep2、Huh7)和正常肝细胞株(LO2),通过免疫印迹(Western blot)实验方法检测肝癌细胞及正常肝细胞中FIGNL1蛋白表达水平。
  3.采用免疫荧光(qPCR)实验方法检测肝癌细胞株(Hep2、Huh7)和正常肝细胞株(LO2)中FIGNL1mRNA的表达。
  4.采用Lipofectamine○RRNAiMAX转染试剂分别向肝癌Huh7细胞转染inhibitorFIGNL1及inhibitorNC。用免疫荧光(qPCR)实验方法验证其转染效率,并用Westernblot检测FIGNL1在细胞中的表达情况。
  5.采用CCK8实验方法检测肝癌Huh7细胞分别转染inhibitorFIGNL1和inhibitorNC后的增殖情况。
  【结果】
  1.TCGA数据库显示,在343组标本中,肝细胞癌组织为实验组,正常肝细胞组织为对照组,FIGNL1在肝细胞癌组织中的表达显著高于正常组织。
  2.Kaplan-Meier生存分析显示FIGNL1过表达的患者预后更差;Logistic回归分析发现FIGNL1的表达水平与临床分期呈正相关;多因素cox比例模型分析显示FIGNL1的表达是独立的预后预测因素。
  3.蛋白免疫印迹(Western blot)实验结果显示FIGNL1在肝细胞癌细胞株的表达明显高于正常肝细胞株,免疫荧光(qPCR)实验结果显示FIGNL1mRNA在肝细胞癌细胞株的表达明显高于正常肝细胞株。
  4.免疫荧光(qPCR)实验检测转染后肝癌Huh7细胞中FIGNL1mRNA的表达,蛋白免疫印迹(Western blot)实验检测转染后肝癌Huh7细胞中FIGNL1蛋白表达,结果显示实验组(Huh7 inhibitor FIGNL1)与对照组(Huh7 inhibitor NC)比较,inhibitorFIGNL1可显著下调FIGNL1在肝癌Huh7细胞中的表达量,差异有统计学意义(P<0.05)。
  5.CCK8实验结果显示转染后实验组(Huh7 inhibitor FIGNL1)细胞增殖水平显著低于对照组(Huh7 inhibitor NC),差异有统计学意义(P<0.05)。
  【结论】
  1.FIGNL1在肝癌细胞中呈高表达,高水平FIGNL1是肝细胞肝癌患者总生存不良的独立预后因素。
  2.FIGNL1可促进肝癌细胞增殖。
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