乳腺分泌物中体细胞的研究与应用已突破了其作为乳腺炎的判定指标,在乳腺细胞培养及乳腺细胞基因表达方面有广阔的应用前景。为此,本研究旨在利用牛乳汁体细胞研究乳腺葡萄糖转运和乳腺免疫相关因子的表达。主要结果如下:1、乳汁体细胞的制备及RNA的提取。以奶牛初乳为研究对象,对制备乳汁体细胞的离心条件进行优化,用直接镜检法和血球计数板计数法及台盼蓝拒染法对牛乳汁体细胞数(somatic cell count,SCC)进行鉴定,参照Puissant法提取乳汁体细胞中的RNA,通过电泳和紫外分光光度计对RNA的纯度、完整性和含量进行检测,RT-PCR法对看家基因GAPDH进行检测。结果表明,乳汁体细胞制备的最佳离心条件是4℃1500xg离心15min,SCC约为24万/ml,活力约为70%;RNA OD260/OD280值为1.84,含量为0.766 mg/ml,可以用于cDNA合成,RT-PCR结果在452bp处清晰存在看家基因GAPDH特异性扩增条带,表明已成功地制备了乳汁体细胞。2、乳腺葡萄糖转运基因的表达。以奶牛初乳和末乳中的乳汁体细胞为研究对象,看家基因GAPDH为内参,对乳汁中乳糖转移酶(GAT-(1,4))和葡萄糖转运载体(GLUT-1、SGLT-1)进行半定量RT-PCR分析。结果表明,在151bp、198bp、267bp位置分别出现三种基因预期大小的特异性扩增条带。乳汁中GAT-(1,4)、GLUT-1、SGLT-1 mRNA转录水平的相对定量结果表明,与初乳相比,末乳中GAT-(1,4) mRNA的转录水平显著降低(P<0.05),GLUT-1 mRNA的转录水平下降2%,SGLT-1 mRNA的转录水平上升28%,差异不显著(P>0.05)。3、乳腺免疫相关因子的表达。以奶牛初乳和末乳中的乳汁体细胞为研究对象,看家基因GAPDH为内参,对乳汁中白细胞介素(IL-8)、趋化因子(CCL5和CXCL14)、κ-CN和α-LA进行半定量RT-PCR分析。结果表明,在209bp、202bp、376bp、151bp和233bp位置分别出现五种基因预期大小的特异性扩增条带。乳汁中IL-8、CCL5、CXCL14、κ-CN和α-LA mRNA转录水平的相对定量结果表明,与初乳相比,末乳中IL-8和α-LA mRNA的转录水平显著降低(P<0.05),CCL5、CXCL14 mRNA的转录水平分别下降21%、40%,κ-CN mRNA的转录水平上升37%,差异不显著(P>0.05)。